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膠體金探針的質(zhì)量鑒定2012/04/07: 1。金顆粒的大小及均勻度用有Formvar支持膜的鎳網(wǎng)蘸取金標(biāo)記試劑，空氣干燥后，透射電鏡下觀察金顆粒的大小及均勻度，計(jì)算平均直徑，如電鏡放大倍數(shù)10萬(wàn)，照片放大為2．5倍，100000×2．5＝250000＝25nm?？諝庵懈稍锖笠宜徕欂?fù)染，在透射電鏡下觀察，可見(jiàn)金顆粒周圍有一明顯的空暈，表示顆粒表面吸附著蛋白質(zhì)分子。支持膜（火棉膠膜）的制備；50mil5％的火棉膠+50mi乙酸戊酯，戊酯火棉膠。2。用免疫細(xì)胞化學(xué)濾紙模型鑒定免疫金制劑的特異性和敏感性制得2．5％的乙酸在WhatmamI號(hào)濾紙

真核細(xì)胞基因組提取2012/03/24: 一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘案叩葎?dòng)物，高等植物的基因組相當(dāng)龐大，如人類細(xì)胞基因組由30億個(gè)堿基對(duì)組成，果蠅基因組有1.4×108個(gè)堿基對(duì)，水稻基因組有1.4×109個(gè)堿基對(duì)。真核細(xì)胞基因組中，約1萬(wàn)－1.5萬(wàn)個(gè)可表達(dá)的結(jié)構(gòu)基因，其它大量存在的是調(diào)控序列和內(nèi)含子序列?？梢哉f(shuō)某特定物種的基因組，包含了該物種生長(zhǎng)，發(fā)育，繁殖等各項(xiàng)生理活動(dòng)的幾乎全部信息量，因而對(duì)真核細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)，組成，以及表達(dá)調(diào)控的研究是至關(guān)重要的，而研究的起點(diǎn)就是要獲得純度高--不含蛋白質(zhì)、糖類、酚、氯仿等污染；得率好--以便有足夠量用于

B因子溶血活性的檢測(cè)2012/03/07: 將RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活補(bǔ)體旁路途徑致使BRBC溶解。將正常人新鮮血清加熱使B因子喪失活性（簡(jiǎn)稱RB），旁路途徑不能激活，當(dāng)加入RRBC時(shí)不發(fā)生溶血。此時(shí)再加入含有B因子的待測(cè)血清，旁路途徑即被激活，RRBC發(fā)生溶血反應(yīng)。根據(jù)溶血程度可測(cè)定待測(cè)血清中B因子的活性。1．RRBC懸液制備（見(jiàn)ACH50測(cè)定）。2．RB的制備取新鮮正常人混合血清（3人以上），56℃水浴加熱15min，滅活其中B因子，新鮮使用或分裝后凍干保存。3．取一定稀釋度的受檢血清與一定量的RB和1％RRBC

透射比濁法測(cè)定血清C3含量2012/03/03: 1．原理血樣本中C3與抗C3血清在液相中反應(yīng)，比例合適時(shí)形成可溶性免疫復(fù)合物。聚乙二醇（PEG6000）可沉淀其免疫復(fù)合物，使溶液的透光率（T）下降。免疫復(fù)合物的量與C3和抗C3量呈函數(shù)關(guān)系，當(dāng)固定抗C3濃度時(shí)，免疫復(fù)合物的形成量主要取決于樣本中C3的含量，并與其呈正相關(guān)。故通過(guò)檢測(cè)溶液吸光度值即可判定樣本中C3含量。2．主要試劑（1）抗C3血清：有試劑出售，一般按說(shuō)明書(shū)的效價(jià)使用，也可預(yù)先用方陣法滴定其效價(jià)。試驗(yàn)時(shí)按zui適工作濃度稀釋。（2）稀釋液：PEG61300dO．00g，NaF10．

火箭免疫電泳法測(cè)定補(bǔ)體C4、B因子2012/03/03: 1．主要試劑（1）羊抗人C4抗血清：按說(shuō)明書(shū)所示單擴(kuò)效價(jià)擴(kuò)大2—4倍稀釋，或分別用含不同濃度抗體的瓊脂糖凝膠澆板，選擇峰高、清晰度適當(dāng)?shù)目贵w濃度為zui適工作濃度。（2）羊抗人B因子抗血清：按說(shuō)明書(shū)所示單擴(kuò)效價(jià)擴(kuò)大3—5倍稀釋，也可按選擇C4抗血清稀釋濃度的方法確定zui適工作濃度。（3）電泳緩沖液：稱取10．30g巴比妥鈉，1．83g巴比妥，溶于1000mL蒸餾水中。此液為pH8．6，離子強(qiáng)度0．05的巴比妥緩沖液。（4）凝膠緩沖液：以定量測(cè)定時(shí)用1：4稀釋的電泳緩沖液，B因子定量時(shí)1：5稀釋

補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測(cè)2012/02/25: 補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測(cè)大多分二步進(jìn)行，*步是用瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦電泳將EDTA抗凝血漿通過(guò)凝膠電泳，根據(jù)分子量的大小、所帶電荷的多少及等電點(diǎn)（p1）將血漿蛋白分開(kāi)。第二步是免疫固定或溶血鑒定，瓊脂糖高壓電泳或聚丙烯酰胺等電聚焦后，在凝膠板上鋪上抗補(bǔ)體某一成分的抗血清，使其與凝膠板上的抗原結(jié)合，形成分子量較大的免疫復(fù)合物沉淀嵌在凝膠孔中，不易漂洗掉，故稱免疫固定。將免疫固定后的凝膠板在生理鹽水中漂洗，除去其他蛋白成分。烤干，考馬斯亮藍(lán)染色。依照第六屆補(bǔ)體定型會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)品，判斷待測(cè)

補(bǔ)體C4溶血覆蓋技術(shù)2012/02/25: 電泳是通過(guò)電場(chǎng)作用將C4遷移率不同的同種異型分離開(kāi)，然后依照分型標(biāo)準(zhǔn)定型。在某些情況下，C4A某種同種異型與C4B某種同種異型遷移率相同不易區(qū)分開(kāi)，此時(shí)可用溶血覆蓋技術(shù)加以區(qū)別。1．原理用肼處理豚鼠血清，可滅活其補(bǔ)體成分C4，使之成為幟缺乏的血清。將C4缺乏的豚鼠血清與致敏的SRBCl昆合，因缺乏C4，補(bǔ)體的攻膜效應(yīng)不能發(fā)揮，將?昆合物與一定濃度瓊脂糖混合傾注在電泳完畢的凝膠板上，凝膠板上C4區(qū)帶使混合物中的C4成分得以補(bǔ)償，溶血反應(yīng)發(fā)生，凝膠板上C4條帶區(qū)可出現(xiàn)透明溶血帶。C4B的溶血活性較C

聚乙二醇(PEG)沉淀試驗(yàn)檢測(cè)CIC2012/02/08: 聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)是一種無(wú)電荷的直鏈大分子多糖，可非特異性地引起蛋白質(zhì)沉淀。沉淀具有可逆性，被沉淀的蛋白質(zhì)生物活性亦不受影響。不同濃度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白質(zhì)，在pH值、離子濃度等條件固定時(shí)，蛋白質(zhì)分子量越大，用以沉淀的PEG濃度越小。由于PEG6000對(duì)蛋白質(zhì)沉淀具有良好的選擇性，所以在IC測(cè)定中主要采用PEG6000。PEG使IC沉淀的機(jī)理可能在于使其自液相中空間排斥而析出，此外，PEG還可抑制CIC解離，促進(jìn)CIC進(jìn)一步聚合成更大的凝聚物而被沉

聚乙二醇(PEG)沉淀補(bǔ)體消耗試驗(yàn)2012/02/08: 用低濃度PEG將IC沉淀，沉淀物中加入補(bǔ)體，以溶血反應(yīng)檢測(cè)補(bǔ)體消耗率。(一)試劑1．熱聚合人ISC：制備方法同PEG沉淀試驗(yàn)。2．硼酸緩沖鹽水(朋S)含硼酸0．1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl75mmol/L，調(diào)整為pH8.43．PEG用BBS將PEG配成12.5%和2.5%。4．0.2mol/LEDTA-Na2用1mol/LNaOH調(diào)整為pH7．2。5．5XVB保存液NaCl85，0g，巴比妥5．75g，巴比妥鈉3．75g，加蒸餾水約1500ral，加熱溶解后補(bǔ)加蒸餾水至2000m

細(xì)胞受體結(jié)合免疫測(cè)定CIC法2012/02/04: 細(xì)胞受體結(jié)合免疫測(cè)定法是根據(jù)CIC可與某些細(xì)胞表面的Fc受體或補(bǔ)體受體結(jié)合而建立的細(xì)胞技術(shù)，這類方法有靈敏度較高，特異性較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，但需進(jìn)行活細(xì)胞培養(yǎng)或細(xì)胞分離，影響因素多，重復(fù)性較差，目前僅適用于實(shí)驗(yàn)研究。此類技術(shù)有多種方法。Raji細(xì)胞是從Burkitt淋巴瘤患者分離建株的B淋巴細(xì)胞系?？稍隗w外連續(xù)傳代培養(yǎng)，細(xì)胞表面沒(méi)有膜免疫球蛋白，Pc受體的親和力很低，但有C3、C3b和C3d受體及Clq受體，而且不易脫落。因此能使結(jié)合補(bǔ)體的IC吸附在細(xì)胞上，然后再于反應(yīng)系統(tǒng)中加入熒光素或i125標(biāo)記的抗

特異性循環(huán)免疫復(fù)合物的測(cè)定2012/02/04: 特異性CIC分為單特異性CIC和雙特異性CIC兩類。前者適用于檢測(cè)已知抗原及其相應(yīng)抗體組成的CIC。雙特異性CIC是指對(duì)組成CIC的抗原、抗體和補(bǔ)體中某兩種成分組合明確的CIC，常采用的檢測(cè)方法為ELISA和RIA技術(shù)，需要兩種特異性各異的抗體。因此，檢測(cè)要求條件較高，但能較全面地反映CIC的病理意義。在檢測(cè)雙特異性CIC時(shí)，由于要求有兩種特異性抗體，每種抗體均可用作包被或檢測(cè)抗體，故具體到檢測(cè)某類雙特異性CIC時(shí)，根據(jù)兩種抗體的不同，可使用兩種方法。以ELISA法為例，如檢測(cè)HBsAg／IgC

中國(guó)體外診斷產(chǎn)業(yè)發(fā)展歷史2011/12/30: 體外診斷產(chǎn)品按檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的檢測(cè)項(xiàng)目可分為幾個(gè)主要大類：生化、免疫、血液及臨檢、微生物、分子診斷等。體外診斷產(chǎn)業(yè)也是隨著醫(yī)學(xué)事業(yè)的不斷發(fā)展而成長(zhǎng)起來(lái)的。從上世紀(jì)八十80年代中期開(kāi)始陸續(xù)有些外資、民營(yíng)的企業(yè)開(kāi)始開(kāi)發(fā)生產(chǎn)相應(yīng)產(chǎn)品，也有些屬于國(guó)有的企業(yè)單位生產(chǎn)了一些產(chǎn)品，但沒(méi)有大規(guī)模的政府主導(dǎo)和投入，也沒(méi)有相應(yīng)的產(chǎn)業(yè)政策。當(dāng)時(shí)的產(chǎn)品主要是以檢測(cè)試劑為主，和一些半自動(dòng)小型儀器。隨著20二十年的發(fā)展，中國(guó)的體外診斷產(chǎn)業(yè)已經(jīng)有了巨大發(fā)展和變化。，目前中國(guó)體外診斷產(chǎn)品已經(jīng)包括了這個(gè)領(lǐng)域的幾個(gè)主要大類，并且從試劑到

ASA抗精子抗體ELISA試劑盒2011/12/30: 用于人血清中抗精子表面抗原自身抗體體外定量檢測(cè)的酶免試劑盒。1、說(shuō)明在西方國(guó)家，不孕夫婦的比例占總?cè)巳旱?0-15%（Haasetal，1980）。目前人們還不能的知道由免疫學(xué)因素導(dǎo)致不孕的發(fā)病率是多少。由于有很多不同的檢測(cè)方法，人們對(duì)抗精子抗體在不孕中的作用存在著很大爭(zhēng)議。在檢測(cè)抗精子抗體的傳統(tǒng)檢測(cè)方法中，精子凝集檢測(cè)和精子固定檢測(cè)已被廣泛應(yīng)用。這些方法及其它凝集檢測(cè)都很耗費(fèi)時(shí)間，并且結(jié)果與其操作不協(xié)調(diào)。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，用ELISA檢測(cè)抗精子抗體具有很多優(yōu)點(diǎn)。IBL公司的抗精子抗體ELI

細(xì)菌與結(jié)腸癌之間存在聯(lián)系2011/12/21: 細(xì)菌與結(jié)腸癌之間存在點(diǎn)擊次數(shù)：26發(fā)布時(shí)間：2011-11-7達(dá)納法伯癌癥研究所和布洛德研究所的科學(xué)家們?cè)诮Y(jié)腸直腸癌中發(fā)現(xiàn)存在大量細(xì)菌，他們認(rèn)為這有可能是導(dǎo)致癌癥的一個(gè)信號(hào)，同時(shí)也是診斷、預(yù)防和治療這種癌癥的一個(gè)關(guān)鍵。研究人員在《基因組研究》雜志網(wǎng)絡(luò)版上報(bào)告說(shuō)，他們?cè)?例結(jié)腸直腸腫瘤的樣本中發(fā)現(xiàn)大量的梭菌屬細(xì)胞。盡管這不一定意味著這些細(xì)菌會(huì)幫助結(jié)腸直腸癌的形成，但它提供了未來(lái)的研究方向。該雜志還發(fā)表了加拿大卑詩(shī)癌癥中心和西蒙弗雷澤大學(xué)研究人員的文章，他們報(bào)告了類似的發(fā)現(xiàn)。在美國(guó)，結(jié)腸直腸癌是因癌

兩項(xiàng)研究揭示益生菌作用機(jī)制2011/12/21: ：近年來(lái)益生菌倍受矚目，這類小小細(xì)菌能通過(guò)改善宿主腸道菌群生態(tài)平衡而發(fā)揮有益作用，那么它們?yōu)槭裁茨軒椭纳扑拗鞯慕】邓侥?？近期兩個(gè)研究組分別在Science-TranslationalMedicine，PNAS雜志上發(fā)表文章，報(bào)道了益生菌的作用機(jī)制，以及腸道對(duì)于益生菌的反應(yīng)。生物通www.ebiotrade.com生物通www.ebiotrade.com生物通報(bào)道：近年來(lái)益生菌倍受矚目，這類小小細(xì)菌能通過(guò)改善宿主腸道菌群生態(tài)平衡而發(fā)揮有益作用，那么它們?yōu)槭裁茨軒椭纳扑拗鞯慕】邓侥?？近期兩個(gè)

表皮生長(zhǎng)因子（EGF）的測(cè)定方法2011/12/17: EGF主要來(lái)源于頒下腺。成年人許多組織中也表達(dá)EGF。人成纖維細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒(méi)有種屬特異性，人和小鼠的EGF對(duì)人成纖維細(xì)胞的作用相同。1．Swiss3T3細(xì)胞增殖法（1）用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss3T3細(xì)胞調(diào)整成1×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中（5mL），置37C5％C02溫箱中培養(yǎng)4～5d，待細(xì)胞匯合后，更換上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d，此時(shí)細(xì)胞數(shù)不再增多。（2）分別加入200ral系列稀釋的待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對(duì)照加培養(yǎng)液，繼續(xù)培

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α（TGF-α）的測(cè)定2011/12/17: 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α（transforminggrowthfactor-α，TGF-α）的結(jié)構(gòu)和功能與TGF相似，屬EGF家族。檢測(cè)EGF生物學(xué)活性的方法也可以檢測(cè)TGF-α的活性。此外，EGF能誘導(dǎo)3T3小鼠的J2細(xì)胞合成DNA，TGF-α與EGF競(jìng)爭(zhēng)受體，抑制EGF的作用，故可通過(guò)抑制EGF誘導(dǎo)的DNA合成試驗(yàn)檢測(cè)TGF-α的活性。1．將3T3J2細(xì)胞培養(yǎng)在含0．5％FCS的DMEM培養(yǎng)液中，用0．25％胰蛋白酶消化細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞2次，并配成6×104／mL。2．于24孔培養(yǎng)板每孔加入

MTF比色法測(cè)定slL-1的生物活性2011/12/17: 四甲基偶氮唑鹽[3—（4.5-dimethylthiazol-2-Y1）-2，5-diphenyltetmzolimnbromide，MTF）在活細(xì)胞線粒體的琥珀酸脫氫酶作用下，被還原成藍(lán)黑色的MTr-甲脂，形成MTr-甲鐕的量與細(xì)胞增殖程度呈正相關(guān)。故通過(guò)測(cè)定細(xì)胞形成MTF-甲鐕量，可間接定量分析細(xì)胞的增殖情況，具體步驟如下：（1）用PBS溶解MTT為5mg／mL，用0．22／zm膜濾器除菌及雜質(zhì)。（2）加MTF至培養(yǎng)的細(xì)胞及IL-1樣品中，10uL／孔，37~C溫育4ho（3）于每孔加酸化異

神八實(shí)驗(yàn)揭秘:線蟲(chóng)受輻射太空中長(zhǎng)蛋白質(zhì)2011/12/09: 11月18日凌晨，神舟八號(hào)飛船搭載的生物培養(yǎng)箱在神八落地后幾乎是刻不容緩地被送回北京。據(jù)介紹，培養(yǎng)箱中裝載樣品33種，開(kāi)展了17項(xiàng)空間生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)。如今實(shí)驗(yàn)有了什么進(jìn)展？我們就從中選取幾項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，介紹給您——神八實(shí)驗(yàn)揭秘線蟲(chóng)的太空之旅我是一條線蟲(chóng),但不是你想象中的寄生蟲(chóng)，你可以叫我的英文名字：C.elegans。我坐著神八飛船，在太空進(jìn)行了長(zhǎng)達(dá)十六天半的旅行。自然狀態(tài)下，我生活在泥土中，以細(xì)菌為食。成年后身長(zhǎng)約1毫米，人類在顯微鏡下才能看清。我通體透明，長(zhǎng)得不好看。可大連海事大學(xué)環(huán)境系統(tǒng)生物學(xué)研究

武大生科院PNAS文章2011/12/09: 生物通報(bào)道：來(lái)自武漢大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院的研究人員發(fā)表了題為“Tripartitemotif8（TRIM8）modulatesTNFα-ａndIL-1β–triggeredNF-κBactivationbytargetingTAK1forK63-linkedpolyubiquitination”的文章，發(fā)現(xiàn)了TRIM蛋白家族成員：TRIM8的關(guān)鍵作用，這為進(jìn)一步分析TNFα和IL-1β介導(dǎo)的NF-κB途徑提供了新思路，也有助于科學(xué)家們深入了解NF-κB途徑相關(guān)的病理機(jī)制。相關(guān)成果公布在《美國(guó)國(guó)家科學(xué)

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