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雙判定標準判定qPCR擴增特異性，提升Ct值真實性2020/04/09

qPCR實驗易做，但數(shù)據(jù)分析并非想象中的那么容易！數(shù)據(jù)分析的好與壞，極大程度上依賴于qPCR原始結(jié)果的質(zhì)量。qPCR結(jié)果的評價指標?溶解曲線，是qPCR結(jié)果判定的第—要素。它的作用是判定目的基因是否得到擴增。理論上，當反應(yīng)體系中僅是目標基因的擴增，才是有效擴增。?標準曲線，是qPCR結(jié)果判定的金標準。（在溶解曲線判定為特異性擴增后）它的作用是測定引物的擴增效率及試劑的檢測上下限。根據(jù)文章發(fā)表對于qPCR數(shù)據(jù)的要求，擴增效率應(yīng)在90-110%。?擴增曲線，是直接生成qPCR定量的數(shù)據(jù)，即Ct值。從

qPCR進階攻略—帶你玩轉(zhuǎn)儀器設(shè)置2020/04/09

熒光定量PCR實驗是分子實驗室常用的一項技術(shù)。持續(xù)關(guān)注小翊的應(yīng)該都掌握了高質(zhì)量cDNA的獲取方法，引物設(shè)計指南以及反應(yīng)體系的配制技巧（還未get的小伙伴戳文末鏈接），然而上機時，發(fā)現(xiàn)和別人的反應(yīng)條件不一致卻又不敢動儀器？本期小翊將帶你玩轉(zhuǎn)qPCR儀器的設(shè)置！目前市面上的qPCR儀器種類五花八門，但基本上儀器的設(shè)置都相對一致。我們以ABI7500為例進行介紹。反應(yīng)板設(shè)置實驗?zāi)康倪x擇：我們將實驗命名為“Yeasen”，進行“Quantitation：ΔΔCt”實驗。實驗方法選擇：如選用SYBRGre

小翊教你做雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/a>2020/04/08

背景介紹熒光素酶生物檢測技術(shù)誕生于1990年，已有供了更可靠的研究30年的發(fā)展史。單熒光素酶檢測系統(tǒng)到雙熒光素酶檢測系統(tǒng)的發(fā)展，為科研人員提供了更為嚴謹?shù)膶嶒炇侄?。雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)在原有的基礎(chǔ)上引入了海腎報告基因，可以排除不同組之間細胞生長狀況、細胞數(shù)目以及轉(zhuǎn)染效率帶來的干擾，起到校正的作用，從而使實驗結(jié)果更為可靠。其發(fā)光原理如下圖1。圖1雙熒光素酶發(fā)光原理實驗方案將靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動子區(qū)克隆在Fireflyluciferase基因的上游，或把3’-UTR區(qū)或lncRNA結(jié)

用數(shù)據(jù)說話，教你做雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/a>2020/04/08

你是否正在驗證miRNA與lncRNA的作用機制？是否在分析確認miRNA的靶基因？在研究轉(zhuǎn)錄因子和啟動子的實驗中，你是否想確定結(jié)合位點的序列？這些問題都可以用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)來嘗試解決。雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)介紹基于熒光素酶（luciferase）的發(fā)光原理，科學家發(fā)明了雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)。該系統(tǒng)包括螢火蟲熒光素酶（Fireflyluciferase）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase）。兩者可催化各自的底物發(fā)生氧化作用產(chǎn)生生物熒光，產(chǎn)生的熒光數(shù)值大小即表

這有一份 FFPE 樣本建庫的檔案，還不趕緊 Pick？2020/04/02

■什么是FFPE？FFPE（Formalin-FixedａndParrffinEmbedded），即福爾馬林固定石蠟包埋樣本。由于這種處理方法能夠較長時間地保存組織或制備檢驗所需的組織標本，所以在臨床病理檢驗、腫瘤基因檢測中應(yīng)用廣泛。在世界范圍內(nèi)，大約有數(shù)十億份組織樣品保存在醫(yī)院或者組織樣品庫中，其中絕大多數(shù)是使用福爾馬林固定石蠟包埋的方法處理的樣品。FFPE樣本通常代表了珍貴且來源廣泛的生物醫(yī)學研究材料，為闡明疾病機制、回顧性研究等提供了寶貴的資源，但是由于樣本制備以及儲存等多方面的原因，F(xiàn)F

Hieff TransTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，讓您對轉(zhuǎn)染自信滿滿2020/04/02

HieffTransTM脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，讓您對轉(zhuǎn)染自信滿滿——效率高不高，一轉(zhuǎn)便知道背景介紹轉(zhuǎn)染能夠讓我們更好的研究目的基因是如何在細胞中進行表達和調(diào)控。目前常見的轉(zhuǎn)染方法有：磷酸鈣共沉淀法、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和ploybrene、機械法（如顯微注射和基因槍法）、陽離子脂質(zhì)體試劑等，其中陽離子脂質(zhì)體試劑轉(zhuǎn)染是目前zui常用的轉(zhuǎn)染方法。圖1：不同轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染示意圖（圖片來源于每日生物評論）不同轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)劣對比轉(zhuǎn)染方法優(yōu)勢劣勢磷酸鈣共沉淀法價格低廉，操作較為簡單轉(zhuǎn)染效率不穩(wěn)定，易發(fā)生DNA

小分子化合物2020/04/02

小分子化合物專題一、信號通路信號通路是指當細胞里要發(fā)生某種反應(yīng)時信號從細胞外到細胞內(nèi)傳遞了一種信息，細胞要根據(jù)這種信息來做出反應(yīng)的現(xiàn)象。信號通路（signalpathway）的提出早可追溯到1972年，不過當時被稱為信號轉(zhuǎn)換（signaltransmission）。1980年M.Rodbell在一篇綜述中提到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（signaltransduction），此后該概念就被廣泛使用了。信號通路是指能將細胞外的分子信號經(jīng)細胞膜傳入細胞內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)的一系列酶促反應(yīng)通路。這些細胞外的分子信號（稱為配體，l

（UDG）, Heat-Labile高效預(yù)防PCR氣溶膠污染2020/03/31

UracilDNAGlycosylase,Heat-Labile高效預(yù)防PCR氣溶膠污染——酶活高效，活性可控操作環(huán)境中的氣溶膠污染是造成PCR結(jié)果假陽性zui常見的因素。美國科學家Lindahl早在大腸桿菌和枯草芽孢桿菌中發(fā)現(xiàn)了UDG酶（UracilDNAGlycosylase，尿嘧啶DNA糖基化酶），利用UDG酶選擇性水解含dU的DNA單鏈或DNA雙鏈的機制，巧妙地引入dUTP取代PCR體系中的dTTP而構(gòu)成了dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)。穩(wěn)定使用該系統(tǒng)，可有效消除PCR體系中混入的擴增殘留

性能怪獸，集體驗度和滿意度于一身的qPCR預(yù)混液2020/03/30

性能怪獸，集體驗度和滿意度于一身的qPCR預(yù)混液熒光定量PCR是一類高靈敏的實驗，要求實驗人員操作高度精細化。因此，在進行qPCR實驗過程中，我們總是必可避免的會遇到問題：一、非實驗因素的相關(guān)問題?實驗室qPCR實驗項目多，儀器被占用，辛苦配制后的反應(yīng)體系不知如何處置?定量樣品多，加樣任務(wù)繁重，眼花目眩擔心加樣錯誤，實驗結(jié)果不可信?上機時間長，上機實驗次數(shù)受限，實驗任務(wù)不能按計劃定期完成?實驗室儀器更換新儀器，實驗室定量儀器多，定量試劑與儀器不匹配二、受實驗因素限制的問題：?低豐度基因定量問題?

何必舍近求遠？國內(nèi)本土優(yōu)質(zhì)IVD診斷原料值得信賴2020/03/30

何必舍近求遠？國內(nèi)本土優(yōu)質(zhì)IVD診斷原料值得信賴原料短缺，國內(nèi)IVD企業(yè)產(chǎn)能受阻近日，加拿大卑詩省疾控中心表示，用于新冠病毒核酸測試的拭子（swabs）出現(xiàn)了供應(yīng)短缺。除拭子外，膠體金試紙條、診斷酶等新冠檢測關(guān)鍵用料全部面臨缺貨情況。因國內(nèi)IVD原料起步晚、品質(zhì)良莠不齊等現(xiàn)象的存在，國內(nèi)IVD企業(yè)診斷原料酶長期依賴進口。隨著國外新冠疫情大面積蔓延，新冠檢測試劑盒需求猛增。但由于跨國供應(yīng)鏈問題，多家國內(nèi)IVD企業(yè)拿著大量的境外訂單，卻面臨進口原料儲備不足，產(chǎn)能受限的制約。國產(chǎn)優(yōu)質(zhì)IVD原料值得信賴

熒光定量實驗問題，我們來解決——這里有專屬于你的定量試劑2020/03/27

您的熒光定量實驗問題，我們來解決————這里有專屬于你的定量試劑作為實驗達人，是否會遇到以下qPCR實驗難題？在Prime3設(shè)計出的眾多引物中徘徊不定，且糾結(jié)于所選的引物的好與壞？既糾結(jié)于溶解曲線的峰型，而又缺少理想溶解曲線峰型的理論支持？既要排長隊預(yù)約qPCR儀，又要費心勞力、分秒必爭的計算體系配制時間，就為能及時上機？問題的解決只需要一款“高Ct值真實性產(chǎn)品”HieffUNICON®PowerqPCRSYBRGreenMasterMix，采用的抗體法熱啟動TaqDNA聚合酶，有效抑制樣品準備

qPCR實驗的Ct值的合理范圍--Ct值過大或過小的解決方法2020/03/26

理性闡述qPCR實驗的Ct值的合理范圍。（附Ct值過大或過小的解決方法）Ct值是什么？Ct值具有什么樣的作用？Ct值的正常范圍是多少？Ct值太大或者太小的原因？Ct值是熒光定量PCRzui重要的結(jié)果呈現(xiàn)形式。它被用于計算基因表達量差異或者基因拷貝數(shù)。那么熒光定量的Ct值多大可被認為是合理？如何保證Ct值的有效范圍呢？今天就讓小編來為大家解答這個問題。Ct值是什么？qPCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設(shè)定的熒光閾值時的所對應(yīng)的擴增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代

掌握這幾個影響因素，你的反轉(zhuǎn)錄實驗就完美了2020/03/26

小翊君前幾期一直在和大家聊qPCR，今天我們開啟一個新的話題，聊一聊反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）定義:反轉(zhuǎn)錄過程簡單來說是以RNA為模板合成DNA的過程，是對中心法則的重要修正和補充。中心法則通常會出現(xiàn)兩個不同的表述，逆轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄，二者的本質(zhì)區(qū)別在于：反轉(zhuǎn)錄是在研究過程中人為提取RNA并以之為模板人工合成DNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄是RNA病毒自主行為，以RNA為模板形成DNA的過程。前者發(fā)生在體外，后者發(fā)生在體內(nèi)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的示意圖如下圖所示：反轉(zhuǎn)錄實驗過程看似簡單的反

三色預(yù)染蛋白marker一眼鎖定您的目的蛋白2020/03/26

三色預(yù)染蛋白marker——一眼鎖定您的目的蛋白YEASEN蛋白marker，采用超純且已校準的蛋白作為標準，可直接上樣。分子范圍高達10-245kDa，條帶濃度高達0.1-0.4mg/mL，具有靚麗清晰的條帶和寬泛的條帶范圍，可在PAGE、WesternBlotting等蛋白實驗中全程監(jiān)測電泳進程、評估轉(zhuǎn)印效率、可靠定位您的目的蛋白！三色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準10-180kDa三色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標準10-245kDa產(chǎn)品特點1.條帶銳利度高圖1.將20351和20352與T品牌的產(chǎn)品進行電泳結(jié)

Yeasen*特級胎牛血清2020/03/26

背景介紹血清主要作用是為細胞生長提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷，對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。根據(jù)牛出生時間和血清采制分離方法的不同可將血清分為以下幾種：血清品質(zhì)等級:胎牛新生牛小牛成年牛產(chǎn)品信息及特點純凈的來源，穩(wěn)定的性能決定了血清能否成為細胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。Yeasen特級胎牛血清取自南美唯—被認可的可以出口中國牛血清的國家——烏拉圭。Yeasen為您提供的*血清。目前Yeasen特級*胎牛血清已經(jīng)受到了高學府和院校的認可

掌握這幾個影響因素，你的反轉(zhuǎn)錄實驗就了2020/03/24

小翊君前幾期一直在和大家聊qPCR，今天我們開啟一個新的話題，聊一聊反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）定義:反轉(zhuǎn)錄過程簡單來說是以RNA為模板合成DNA的過程，是對中心法則的重要修正和補充。中心法則通常會出現(xiàn)兩個不同的表述，逆轉(zhuǎn)錄和反轉(zhuǎn)錄，二者的本質(zhì)區(qū)別在于：反轉(zhuǎn)錄是在研究過程中人為提取RNA并以之為模板人工合成DNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄是RNA病毒自主行為，以RNA為模板形成DNA的過程。前者發(fā)生在體外，后者發(fā)生在體內(nèi)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的示意圖如下圖所示：反轉(zhuǎn)錄實驗過程看似簡單的反

溶酶體探針（LysoTracker & LysoSensor）2020/03/20

溶酶體探針（LysoTracker&LysoSensor）——酸性細胞器示蹤劑背景介紹溶酶體是一種分解蛋白質(zhì)、核酸、多糖等生物大分子的細胞器。溶酶體具單層膜囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)含60余種酸性水解酶，包括蛋白酶、核酸酶、糖苷酶、脂酶等，分解各種外源和內(nèi)源的大分子物質(zhì)。溶酶體水解酶的適pH為3.5~5.5，溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境是依靠膜上的特殊轉(zhuǎn)運蛋白(H泵)來維持的。溶酶體標志酶為酸性磷酸酶，目前針對溶酶體的定位也主要圍繞酸性磷酸酶展開。圖1.溶酶體結(jié)構(gòu)溶酶體功能溶酶體存在著形態(tài)上的多樣性和異質(zhì)性，根據(jù)溶酶體

雙熒光素酶報告基因檢測數(shù)據(jù)集2020/03/17

雙熒光素酶報告基因檢測數(shù)據(jù)集雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)因其具有靈敏度高、無細胞內(nèi)源性表達干擾等優(yōu)勢，現(xiàn)已被廣泛用于基因表達調(diào)控的研究中。該系統(tǒng)包括螢火蟲熒光素酶（Fireflyluciferase）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase），通過和底物的相互作用檢測基因的表達。通常海腎熒光素酶相對更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參，以消除細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異，實驗結(jié)果為螢火蟲熒光素酶的熒光值和海腎熒光素酶的熒光值的比值。雙報告檢測方法的應(yīng)用十分廣泛，如調(diào)控元件功能研究、轉(zhuǎn)錄因子研究、信號轉(zhuǎn)

關(guān)于抗冠狀病毒新研藥Remdesivir信息，看完這篇就夠了2020/03/03

背景在中國農(nóng)歷新年伊始，源于中國中部省份湖北武漢新型冠狀病毒所引起的肺炎疫情牽動著億萬國人的心，全國上下積極行動都在為消滅此次疫情貢獻自己的力量。新型冠狀病毒是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株，被暫命名為（2019-nCoV）。1、冠狀病毒（coronavirus）是一個大型病毒家族，已知可引起感冒以及中東呼吸綜合征（MERS）和嚴重急性呼吸綜合征（SARS）等較嚴重疾病。WHO（世界衛(wèi)生組織）介紹，經(jīng)詳細調(diào)查結(jié)果顯示，中國2002年發(fā)生了從果子貍傳至人的SARS冠狀病毒疫情；沙特阿拉伯20

NTP Set Solution2020/03/03

NTPSetSolution(ATP,CTP,UTP,GTP,100mMeach）產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格價格（元）NTPSet(ATP,CTP,UTP,GTP,100mMeach）10133ES031Set(4vial)2453.00產(chǎn)品描述本品為ATP、UTP、GTP和CTP共4種溶液的套裝，可用于分子生物學中多種相關(guān)應(yīng)用，如體外轉(zhuǎn)錄、RNA擴增，siRNA合成等。還可作為多種酶的反應(yīng)底物或輔酶。本品為純度≥99%的ATP、UTP、GTP和CTP的三鈉鹽配制所得的無色透明水溶液，pH(2