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科德角國際生物醫(yī)學科技(北京)有限公司
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鱟試驗的缺陷有哪些?2022/11/23
自1964年美國學者Levin和Bang發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性菌內毒素可能迅速引起鱟血細胞裂解液發(fā)生凝固、從而開發(fā)出了靈敏度和特異性都非常高的用于檢查藥品及醫(yī)療用具中的污染內毒素的方法,即鱟試驗法。在此方法建立以來的30多年間,各國學者對此方法及內毒素本質的深入研究可謂方興未艾。加之近年來,高靈敏度、高特異性鱟試劑的開發(fā)以及各種試驗技術、試驗方法等的不斷進步,鱟試驗法不僅在藥學,而且在醫(yī)學、微生物學等各個領域的應用也得到了突飛猛進的發(fā)展,尤其是血中、體液中微量內毒素的含量測定。革蘭氏陰性菌感染癥的診斷以
內毒素血癥與腹腔感染2022/11/22
腹腔內感染是臨床實踐中經常遇到的一個問題,嚴重者可并發(fā)敗血癥、彌漫性血管內凝血、甚至多器官功能衰竭。近年來人們普遍認為,內毒素血癥的形成是這些病理變化的始動環(huán)節(jié),而內毒素的生物學效應是通過腫瘤壞死因子來實現(xiàn)的。有學者認為腹膜炎早期內毒素的吸收可能以門靜脈的途徑為主,而后經胸導管、淋巴途徑則是重要方式,另外經腹膜、粘膜和膈的吸收方式也可能存在。秦明放等人研究表明,在被研究的58例腹腔感染患者中,內毒素含量增高,是正常的1~7倍。結果證實,死亡病例和存活病例間血清腫瘤壞死因子存有顯著性差異。從而證實
淋巴液生成增加和外周血內毒素滅活功能降低的影響2022/11/22
研究表明,正常大鼠門靜脈,胸導管和動脈內毒素水平極低,順序為門靜脈>動脈>胸導管。大鼠盲腸切開誘發(fā)腹膜炎后130分鐘,動物脂多糖濃度顯著升高,其順序為胸導管>門靜脈>動脈。胸導管內脂多糖濃度較門靜脈高432倍,且內毒素血癥出現(xiàn)的時間與其變化曲線相一致。由此說明,腹腔淋巴管——胸導管是內毒素進入體循環(huán)的重要替代途徑。許多研究表明,外周血滅活內毒素的能力迅速而強大,將內毒素直接注人外周靜脈約90%在5分鐘內被消滅,因而前述各種因素導致的內毒素溢入體循環(huán),只要病人體液解毒功能正常,內毒素就不可能突破第
鱟試驗法的應用范圍介紹2022/11/22
鱟試驗法自1968年建立以來的30年間。隨著研究的不斷深入,其應用領域也越來越廣。主要表現(xiàn)在以下幾個方面。(1)藥品方面:關于藥品用鱟試驗法檢測的可行性研究人們從很早就開始了,1984年FDA的Twohy就333個種類的2525個樣品進行了細菌內毒素的添加試驗,并在MVD藥液濃度時就15個種類的樣品進行了反應干擾試驗。由報告中發(fā)現(xiàn)幾乎所有的藥品都可以用鱟試驗來進行檢測。美國藥典1995年XXⅢ版不僅把三種方法都進行了收載。且收載品種也已上升為620個,而兔法下降為30個左右,在這620個品種當中
肝臟功能減退及門體系統(tǒng)功能障礙會引發(fā)腸源性內毒素血癥2022/11/21
內毒素在腸道由粘膜上皮吸收后,進入門脈血流,此時的“門脈內毒素血癥”被認為是一種“正?!鄙頎顟B(tài)。這是因為肝臟單核巨噬細胞系統(tǒng),主要是Kuffer細胞對內毒素有強大的清除能力,不至于造成循環(huán)內毒素血癥。在肝臟,Kuffer細胞以胞飲的形式攝取內毒素,通過濃縮脂多糖分子的類脂含量和縮短О-抗原的長度而修飾內毒素,然后交給肝細胞進一步解毒。重度肝病時在肝實質細胞損害的同時也伴有Kuffer細胞的嚴重損害;肝硬化時,雖然Kuffer細胞的形態(tài)無顯著改變,但其數(shù)目卻明顯減少,結果:大量內毒素在肝臟未經解
腸源性內毒素血癥的發(fā)病機制:腸道內毒素生成和攝取增多2022/11/21
許多非革蘭氏陰性菌感染的重癥病人及處于應激狀態(tài)的患者,絕大部分出現(xiàn)內毒素血癥,血漿中內毒素主要來源于腸道內毒素的吸收,因此腸源性內毒素血癥幾乎是所有重癥患者經歷的病理生理過程,有時也是病人死亡的主要原因。腸道的主要功能之一是阻止腸腔內細菌和內毒素移位到其他組織。腸道屏蔽功能下降,致腸腔內大量細菌或內毒素向腸外組織遷移的過程稱為細菌或內毒素移位,對于不伴有革蘭氏陰性菌感染的內毒素血癥患者,其內毒素源于腸道內毒素的移位,稱之為腸源性內毒素血癥,腸源性內毒素血癥的發(fā)病機制可能與腸道內毒素生成和攝取增多
內毒素會導致什么疾???2022/11/18
隨著近十年來人們對疾病病因-病理認識的不斷深化,許多疾病與內毒素的關系日益明確,除革蘭氏陰性菌感染﹑毒血癥、急性彌漫性血管內凝血等外、革蘭氏陽性菌感染、病毒感染及其他病原微生物感染,以及許多感染性疾病的致死性并發(fā)癥和多種休克及多種危急重癥,如成人呼吸窘迫綜合征、急性腎衰、急性肝衰、出血、多器官功能衰竭,腸源性休克及多種晚期休克等的發(fā)病,加重或轉歸與內毒素血癥密切相關。事實上存在著一大類疾病,它們的發(fā)生、發(fā)展或預后都與內毒素有關,而按病因分類的現(xiàn)代醫(yī)學卻迄今只是支離破碎地把它們分屬于各個不同系統(tǒng)的
鱟試驗法的國內外發(fā)展現(xiàn)狀簡介2022/11/18
細菌內毒素檢查法作為一種法定的檢查方法最初收載于1980年的美國藥典。而后英國藥典(1989年)、EP(1987年)中國藥典(1995年)、日本藥典(1988年)也相繼收載了這一檢查法。從Levin和Bang于1964年發(fā)現(xiàn)內毒素可迅速引起試劑形成凝膠起,在以后的30多年間,世界各國都在不斷地研究和探索當中,而且藥典的收載品種和檢驗方法也在不斷增加。美國FDA于1987年頒布的《人用,用藥品的生物制品內毒素試驗的暫行規(guī)定》中除了對單個品種進行收載外,同時在方法學上也對定量的比濁法和比色法等作了詳
抗生素誘導內毒素釋放的臨床意義2022/11/17
抗生素誘發(fā)內毒素釋放在臨床上具有重要意義,有研究發(fā)現(xiàn),抗生素治療后,血中內毒素升高的同時伴有血壓下降和乳酸升高、乳酸脫氫酶升高、葡萄糖下降,表明組織損傷加重。Shen等人臨床發(fā)現(xiàn),10例革蘭氏陰性桿菌敗血癥患者中,7例在抗生素治療后血中內毒素明顯升高,其中2例死亡,死亡時菌血癥控制,但血中內毒素明顯升高,而未死亡者隨著菌血癥控制,血中游離內毒素水平相應降低,提示內毒素與死亡密切相關。有人研究證實,抗生素誘生“內毒素釋放”與病情的惡化呈平行關系。另外在革蘭氏陰性菌感染的腦膜炎患者的腦脊液中,抗生素
抗生素能誘導內毒素的釋放2022/11/17
40年代中期,青霉素、鏈霉素、氯霉素等抗生素相繼問世,使感染性疾病的治療進人了嶄新的時代,眾多患者的生命被挽救??股氐亩靖弊饔?,如肝毒性、腎毒性、神經、肌肉阻滯毒性、聽力毒性、中性粒細胞減少,以及破壞腸道生態(tài)環(huán)境等,在各種藥物學中均有詳細記載,在臨床應用時已被醫(yī)師注意,并設法避免。唯有抗生素治療革蘭氏陰性菌感染后引發(fā)的內毒素釋放問題,迄今為止國內外的藥物治療學均不列載。但自抗生素問世以來,就有關于應用抗生素治療后細菌溶解導致內毒素釋放的臨床報道,認為內毒素釋放可能會導致病者血流動力學的暫時惡化
鱟試驗法和熱原檢查法的區(qū)別2022/11/17
關于鱟試驗法與熱原檢查法的主要區(qū)別,可從以下幾個方面來闡述。1.熱原檢查法生物試驗方法,用家兔體溫上升作為指標檢測或檢查醫(yī)藥中是否含有的熱原物質(Pyrogen)。(1)熱原性物質:細菌內毒素、病毒、干擾素、化學物質及其他;(2)細菌內毒素:ENDOTOXIN;(3)是最主要的熱原性物質,還具有其他多種活性。醫(yī)藥品最大的問題就是其中混有熱原性物質;(4)能夠檢出所有的熱原性物質(包括細菌內毒素以外的其他熱原性物質);(5)動物試驗(invivotest)的問題:試驗動物感受性的差異,個體差異,數(shù)
內毒素檢測的臨床意義2022/11/16
內毒素血癥(Endotoxima,ETM)可出現(xiàn)于多種疾病的過程中,內毒素可以誘導氧自由基,白三烯,前列腺素﹑腫瘤壞死因子等十幾種化學介質的釋放而引起休克、彌漫性血管內凝血、成人呼吸窘迫綜合征、多器官功能衰竭等一系列嚴重的變化,成為原發(fā)疾病惡化的因素。Broude認為內毒素是革蘭氏陰性菌的重要致病因素,據(jù)臨床統(tǒng)計,革蘭氏陰性菌感染性休克死亡率高達30%~35%,居各類感染性休克死亡之-首。由于抗菌素的濫用使細菌產生耐藥,插管治療的廣泛應用如靜脈插管、氣管插管﹑導尿等放射性治療的廣泛開展均增加了革
脂多糖結合蛋白與脂多糖受體在內毒素效應中的作用2022/11/15
近年來認識到,內毒素在致病過程中有兩種媒介因子參與。一種是脂多糖結合蛋白(LipopolysaceharideBindingProtein,LBP);另一種為脂多糖受體(CD14),脂多糖受體有兩種存在形式。研究發(fā)現(xiàn),脂多糖結合蛋白/脂多糖受體是體內增敏脂多糖細胞效應的重要系統(tǒng)。脂多糖是58-60KD的糖蛋白,是一種急性反應蛋白,主要由肝臟合成釋放入血。脂多糖結合蛋白與脂多糖的類脂A結合,結合部位位于其NH2-末端200個氨基酸內。當脂多糖為pg/ml水平時,脂多糖的效應依賴脂多糖結合蛋白,而較
內毒素效應中起主要作用的炎癥因子(二)2022/11/15
Cohen等發(fā)現(xiàn)自細胞介素-3有調節(jié)巨噬細胞的功能,但不能單獨刺激其他細胞因子的產生,在內毒素存在的條件下,它可刺激白細胞介素-1、白細胞介素-6和腫瘤壞死因子的分泌。白細胞介素-11是種促進細胞生長分化的因子,在體內和離體實驗中,白細胞介素-11能促進巨噬細胞分化,同白細胞介素-6和集落刺激因子類似,在白細胞介素-3協(xié)同作用下可縮短細胞合成中、早期的G期。與白細胞介素-6不同的是,白細胞介素-11更易刺激巨噬細胞的分化。除了細胞因子之間的互相調控外,機體中的某些物質也可增強內毒素介導產生細胞因
鱟試驗法種類及比較2022/11/15
根據(jù)反應機理的不同又可將鱟試驗法分為以凝膠的形成作為指標的凝膠法,以凝膠的濁度變化作為指標的比濁法以及顯色合成基質水解顯色作為指標的比色法,其中以定性的凝膠法收載最為普通(表3)。根據(jù)反應機理的不同,主要可分為以下幾類:(1)凝膠法(Gel-Clottechnique):可在0.03Eu/ml的范圍內進行半定量測定。(2)比濁法(TurbidimetricAssay):通常在0.006~300Eu/ml的范圍內進行定量。(3)比色法(ColorimetricAssay):操作比較復雜,但靈敏度和
內毒素效應中起主要作用的炎癥因子2022/11/14
內毒素是革蘭氏陰性桿菌細胞壁的主要成分,對機體代謝的影響如對糖的利用障礙、氨基酸的消耗增加都是通過細胞因子實現(xiàn)的。在內毒素介導產生的諸多激素和介質中,最重要的是來自免疫系統(tǒng)和血管內皮細胞系統(tǒng)的細胞因子,主要包括腫瘤壞死因子、白細胞介素-1、白細胞介素-6、白細胞介素-8等。一般認為,單核巨噬細胞是產生細胞因子的主要細胞,故有“細胞因子工廣”之稱。1內毒素在創(chuàng)傷后機體的各種反應中起了觸發(fā)劑的作用,在激活產生的細胞因子中,腫瘤壞死因子-α可能起核心作用。其證據(jù)是注入腫瘤壞死因子后機體幾乎可出現(xiàn)膿毒癥
鱟試驗法的反應機理簡介2022/11/14
鱟試驗法也稱為細菌內毒素檢查法,英文BacterialEndotoxintest,系列用革蘭氏陰性菌所產生的內毒素與TAL或LAL試劑發(fā)生反應,根據(jù)所形成的凝膠化反應,從而定性或定量檢測細菌內毒素的一種體外分析方法。有關細菌內毒素與LAL試劑或TAL試劑的反應機理研究,雖然在研究鱟血凝集反應的初期,levenandBang就已經初步闡明了凝集反應的機理;但進一步從分子水平上的研究工作,一直到70年代后期才逐漸被闡明。鱟試驗凝集反應的機理如下圖所示:即鱟血變形細胞裂解物中含有能被內毒素激活的凝固系
影響宿主對內毒素反應的因素2022/11/11
由于人類種族、性別、地域、所處地理環(huán)境等不同,使得人們抵抗外界刺激侵襲的能力也不相同,因此對內毒素的反應也存在著個體差異。以下幾種因素影響宿主對內毒素的反應。1、殺菌性/穿透性增強蛋白(BPI),來自中性粒細胞,通過與血清脂多糖結合蛋白(LBP)競爭性結合脂多糖,抵消內毒素在循環(huán)中的毒性作用。2、抗脂多糖抗體(IgM)結合并滅活那些宿主已接觸過的異性脂多糖。3、高密度脂蛋白(HDL)代謝并清除脂多糖。4、脂多糖結合蛋白運送脂多糖到炎癥部位,在此啟動炎癥細胞因子反應,在任何部位中,脂多糖結合蛋白的
關于鱟試驗法中假陽性結果的解決方法2022/11/11
樣品中混入細菌內毒素發(fā)生凝集,由形成凝膠的有無來檢測樣品中的內毒素,然而鱟試劑除了內毒素反應外,它同時也會對內毒素以外的其他物質存在凝集反應。因此,勢必會形成假陽性或假陰性的實驗結果。這就是鱟試驗法中的特異性問題。對于假陽性結果的問題,可以說十分復雜。因為對于大多數(shù)樣品來說,主要都為假陰性情況較多,而對于假陽性結果的判斷和排除是很困難的。當我們對一個樣品用鱟試驗法檢測出陽性結果時,一可以說是由于內毒素超過限值所引起,二也可以理解為假陽性結果。因此我們在實驗時要特別注意區(qū)分。在假陽性結果的研究過程
鱟試驗法中的干擾因素有哪些?2022/11/10
由鱟試驗的反應機理我們可以知道:內毒素在二價陽離子參與下,作用凝集酶系統(tǒng)而發(fā)生一系列生化反應,最后形成凝膠。因此,一切阻礙反應機制的因素,均干擾凝膠的形成,形成假陰性結果,作為干擾凝集反應的物質主要有:人血中的多種凝血因子、很多中藥成分、某些生化藥品、抗生素、可使蛋白質變性的物質、高糖溶液、絡合物等等,此外樣品的pH值,反應溫度等也都有一定的影響(表2)。另外一些金屬離子(如Fe、Al、Ca)會對細菌內毒素活性產生影響,從而出現(xiàn)假陰性結果,因此在實驗時,避免使用一些金屬用具,而使用玻璃用具。關于
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