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當(dāng)前位置：科德角國(guó)際生物醫(yī)學(xué)科技（北京）有限公司>>技術(shù)文章

鱟試驗(yàn)法的出現(xiàn)和發(fā)展是怎么樣？2022/11/10: 美國(guó)是發(fā)現(xiàn)、發(fā)明鱟試劑和最先建立鱟試驗(yàn)方法的國(guó)家，早在1956年，美國(guó)動(dòng)物學(xué)家于F·Bang發(fā)表了一篇《鱟的一種細(xì)菌性疾病》的論文，詳細(xì)地闡述了細(xì)菌毒素使蘊(yùn)血凝固的現(xiàn)象，隨后F·Bang和J·Levin合作開始了對(duì)鱟凝血研究，并在1964年提出了鱟血凝集的初步機(jī)理，到了1968年兩人終于建立了鱟試驗(yàn)方法。其后隨著人們對(duì)鱟試劑的開發(fā)研究以及對(duì)鱟試驗(yàn)方法的不斷認(rèn)識(shí)，其技術(shù)越來(lái)越成熟，在1973年，美國(guó)食品藥物管理局（FDA）承認(rèn)鱟試劑是一種生物制品。1980年，美國(guó)藥典第2版（uspxx）首先收載了

內(nèi)毒素是怎么產(chǎn)生的？2022/11/10: 自從內(nèi)毒素被發(fā)現(xiàn)百年來(lái)，人們一直認(rèn)為內(nèi)毒素作為細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分只有在菌體死亡或人工裂解時(shí)才釋放出來(lái)，但近年來(lái)發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性菌在細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期或細(xì)菌營(yíng)養(yǎng)缺乏時(shí)也釋放內(nèi)毒素。應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，革蘭氏陰性菌外膜過(guò)度合成，過(guò)剩的外膜在菌體表面形成許多“皰疹樣結(jié)構(gòu)”(strutureafblebs)，內(nèi)毒素以“出皰疹”的方式被釋放到周圍介質(zhì)中去.菌體外膜上的“皰疹”有大小兩種類型，“大皰疹”在菌體分裂產(chǎn)生橫隔的過(guò)程中形成，隨菌體分裂成兩個(gè)細(xì)菌而死亡；“小皰疹”存在于菌體的外表面

內(nèi)毒素檢測(cè)的方法有哪些？2022/11/09: 內(nèi)毒素的檢測(cè)有傳統(tǒng)的家兔熱原試驗(yàn)（rabbitpyrogentest，RT）、鱟試驗(yàn)法（limulustest，LT）以及其他的一些特殊方法。（一）家兔熱原試驗(yàn)法此方法即將一定量的被檢標(biāo)本靜脈注人家兔體內(nèi)，觀察其注射后的發(fā)熱情況，以決定所檢標(biāo)本中有無(wú)熱原存在。RT法為一種定性檢測(cè)內(nèi)毒素的方法，應(yīng)用歷史較久，此方法本身有許多限制，如家兔對(duì)內(nèi)毒素在反應(yīng)上有個(gè)體差異﹑敏感度不高、不能定量測(cè)出內(nèi)毒素等。（二）鱟試驗(yàn)法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法也稱之謂鱟試驗(yàn)法（LT法）英文為BacterialEndotoxinsT

應(yīng)有鱟試驗(yàn)法檢測(cè)食品中的細(xì)菌內(nèi)毒素含量2022/11/09: 食品安全關(guān)系到每一個(gè)人的身體健康。如今，人們?cè)絹?lái)越重視食品的安全質(zhì)量，食品若是受到細(xì)菌污染，就會(huì)隨著細(xì)菌代謝的過(guò)程中產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素，即使在高溫高壓下，細(xì)菌內(nèi)毒素也不易被破壞。若是人體大量食用則會(huì)產(chǎn)生急性中毒的癥狀，少量長(zhǎng)時(shí)間食用就會(huì)引起慢性中毒，對(duì)人體極其有害。所以對(duì)正式投入市場(chǎng)的食品都需要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)。肉類、蛋、蛋制品、牛奶、飲料等的細(xì)菌內(nèi)毒素主要都是由革蘭氏陰性菌引起的。1、肉制品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)在肉類中的革蘭氏陰性菌，大部分都是假單胞菌。若是食物存放的環(huán)境潮濕且氣溫又高，變形桿菌就很

內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品特點(diǎn)及保存條件2022/11/09: 內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品也可稱為內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，它是大腸桿菌O113:H10的純化提取物，與美國(guó)藥典和歐洲藥典參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素(RSE)使用的菌株相同。廣泛用于各類細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。用作RSE的經(jīng)濟(jì)替代方案，可運(yùn)用在所有鱟試劑檢測(cè)內(nèi)毒素的試驗(yàn)中。此外還用于鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾實(shí)驗(yàn)及設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照及供試品陽(yáng)性對(duì)照的各種陽(yáng)性對(duì)照等實(shí)驗(yàn)。復(fù)蘇后的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品存儲(chǔ)于2-8℃，不能冷凍。內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：1、CSE對(duì)去熱原研究特別有用。2、每個(gè)CSE裂解物批次配對(duì)的分析證書提供特定于批次組合的效力。

內(nèi)毒素對(duì)血液循環(huán)系統(tǒng)的影響及機(jī)理2022/11/08: 內(nèi)毒素可引起白細(xì)胞和血小板減少，激活凝血、纖溶系統(tǒng)，產(chǎn)生出血傾向，可導(dǎo)致彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC）的發(fā)生。其機(jī)理在于內(nèi)毒素（脂多糖）可激活Hageman（Ⅻ）因子，內(nèi)毒素的活性成分類脂A與Ⅻ因子結(jié)合后，在白細(xì)胞參與下促使凝血酶的生成、使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，從而導(dǎo)致彌漫性血管內(nèi)凝血的發(fā)生。DIC的發(fā)生是通過(guò)Ⅻ因子啟動(dòng)內(nèi)、外凝血系統(tǒng)引發(fā)的全身性癥狀。DIC嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致嚴(yán)重的休克癥狀。1、內(nèi)毒素（脂多糖）對(duì)中性粒細(xì)胞的作用及機(jī)理：內(nèi)毒素（脂多糖）能引起人體血液中中性粒細(xì)胞的增多，這是人體對(duì)內(nèi)毒

內(nèi)毒素對(duì)糖代謝的影響及其機(jī)理2022/11/08: 內(nèi)毒素直接或間接損害肝臟，引起糖代謝紊亂及酶學(xué)、蛋白代謝的改變。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明：內(nèi)毒素（脂多糖）注入體內(nèi)后初期可引起血糖的暫時(shí)升高，數(shù)小時(shí)后，可導(dǎo)致血糖的持續(xù)降低，表現(xiàn)為明顯的低血糖癥。（1）致病機(jī)理：脂多糖能刺激腎上腺素的分泌和釋放，使磷酸環(huán)化酶活性增強(qiáng)，加速糖分解，使血糖濃度表現(xiàn)為暫時(shí)性升高。（2）低血糖癥的主要機(jī)理：脂多糖進(jìn)入機(jī)體數(shù)小時(shí)后，始作用于肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞的損傷，使糖原異生的關(guān)鍵酶（如葡萄糖-6-6磷酸酶；丙酮酸羧基酶peck；糖原合成酶）活性降低，抑制糖原的異生和分解，激活丙酮酸

內(nèi)毒素的致病機(jī)理簡(jiǎn)介2022/11/04: 內(nèi)毒素的致病機(jī)理下圖簡(jiǎn)圖表示。1、致熱性極微量(1~5ng/kg)的內(nèi)毒素注射入人體足以引起健康成人2小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)，且維持4小時(shí)左右，而對(duì)于革蘭氏陰性菌感染，慢性消耗性疾病及晚期腫瘤病人，引起發(fā)熱反應(yīng)的最-低內(nèi)毒素劑量可低至0.2~0.5ng。內(nèi)毒素可使人體和動(dòng)物致熱，人體對(duì)內(nèi)毒素致熱原敏感。0.0001~0.005μg/kg傷寒沙門氏菌內(nèi)毒素即可引起人體發(fā)熱，而家兔發(fā)熱量比人高10倍左右。也就是說(shuō)，在正常情況下，人體內(nèi)內(nèi)毒素的正常閾值保持在0.001~0.05ng/ml之間，一旦人體免疫

內(nèi)毒素的生物學(xué)活性是怎么樣的？2022/11/04: 細(xì)菌內(nèi)毒素即脂多糖（LPS）是由脂質(zhì)和多糖組成的大分子物質(zhì)，其活性中心為類脂A。多種生物學(xué)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)：類脂A可介導(dǎo)內(nèi)毒素幾乎所有的生物學(xué)活性，LPS及其類脂A對(duì)機(jī)體可發(fā)揮廣泛的生物學(xué)作用，如致機(jī)體發(fā)熱、休克、彌漫性血管內(nèi)凝血、B淋巴細(xì)胞分裂、內(nèi)臟器官實(shí)質(zhì)性損傷等，嚴(yán)重者可危急生命，常見的疾病如發(fā)熱、感染性疾病，腸道疾病、肝衰、胰腺炎等都與內(nèi)毒素在體內(nèi)的存在密切相關(guān)，且其引起的死亡率甚高，美國(guó)每年因內(nèi)毒素致死的病人達(dá)10萬(wàn)人之多。一、內(nèi)毒素生物學(xué)活性1、非特異地與細(xì)胞膜結(jié)合，干擾細(xì)胞膜正常功能

使用鱟試驗(yàn)法檢測(cè)水質(zhì)內(nèi)毒素含量的優(yōu)點(diǎn)2022/11/04: 水質(zhì)衛(wèi)生安全的細(xì)菌學(xué)指標(biāo)的主要標(biāo)準(zhǔn)一般以大腸菌數(shù)指數(shù)和大腸菌數(shù)值為主。雖然這些方法使用的原料簡(jiǎn)單，操作起來(lái)也方便，但每一個(gè)標(biāo)本都需進(jìn)行檢查，而檢查結(jié)果也需要24至48小時(shí)以內(nèi)才會(huì)出結(jié)果，而使用鱟試驗(yàn)法檢測(cè)水質(zhì)衛(wèi)生，在取樣后2小時(shí)內(nèi)便能得到結(jié)果，速度非?？?。據(jù)國(guó)外報(bào)道，水里面的總內(nèi)毒素的濃度(特別是結(jié)合內(nèi)毒素濃度)與細(xì)菌菌落數(shù)呈正比關(guān)系。如果以細(xì)菌菌落對(duì)總內(nèi)毒素或結(jié)合內(nèi)毒素的對(duì)數(shù)換算值繪制出回歸曲線，可以顯示兩者之間的高度相關(guān)性。因此，可以通過(guò)檢測(cè)水中內(nèi)毒素的量來(lái)了解水中的細(xì)菌污染程度。鱟試驗(yàn)法可

內(nèi)毒素和淋巴細(xì)胞中的細(xì)胞膜非特異結(jié)合的介紹2022/11/03: 內(nèi)毒素是小鼠B淋巴細(xì)胞的致有絲分裂原，它能誘導(dǎo)B細(xì)胞增殖，并且分化成分泌抗體的漿細(xì)胞。T細(xì)胞的少數(shù)亞群也可以對(duì)內(nèi)毒素起反應(yīng)。這些作用的引發(fā)都是通過(guò)內(nèi)毒素和淋巴細(xì)胞（特別是B細(xì)胞）上存在有內(nèi)毒素受體，但是它也可以非特異地和內(nèi)毒素結(jié)合。已經(jīng)知道，類脂A對(duì)淋巴細(xì)胞膜有一定的親和性，堿水解的內(nèi)毒素能增強(qiáng)這種親和作用，而磷脂酰乙醇胺則能夠抑制這種親和作用。在大部分情況下，這種親和作用表現(xiàn)為被動(dòng)的內(nèi)毒素非特異結(jié)合作用。內(nèi)毒素和淋巴細(xì)胞膜也存在著主動(dòng)的非特異結(jié)合，表現(xiàn)在內(nèi)毒素可以顯著降低細(xì)胞膜的膜電壓，產(chǎn)生了

內(nèi)毒素和紅細(xì)胞及血小板細(xì)胞膜的非特異結(jié)合2022/11/03: 1、紅細(xì)胞早在50年代，人們就發(fā)現(xiàn)如果將內(nèi)毒素加入綿羊紅細(xì)胞中能使紅細(xì)胞被動(dòng)致敏，產(chǎn)生凝集，并在外源性同種內(nèi)毒素抗體存在下產(chǎn)生補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解反應(yīng)，在紅細(xì)胞膜肯定存在一種能識(shí)別內(nèi)毒素并能與之結(jié)合的活性物質(zhì)，現(xiàn)在我們知道紅細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素識(shí)別作用不僅可以通過(guò)特異性識(shí)別（內(nèi)毒素受體)，而且可以通過(guò)非特異的結(jié)合來(lái)完成。內(nèi)毒素和紅細(xì)胞的非特異性結(jié)合不僅可以通過(guò)被動(dòng)的疏水作用，而且可以通過(guò)主動(dòng)結(jié)合的方式完成。總之，內(nèi)毒素和紅細(xì)胞之間存在著非特異性的和特異性的結(jié)合，其中非特異性的結(jié)合可以通過(guò)主動(dòng)的和被動(dòng)的兩種

內(nèi)毒素和細(xì)胞膜磷脂成分的非特異結(jié)合2022/11/03: 革蘭氏陰性菌的內(nèi)毒素能夠引起許多細(xì)胞的生理或病理反應(yīng)，這些細(xì)胞包括肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、血小板以及內(nèi)皮細(xì)胞等。這些細(xì)胞產(chǎn)生的反應(yīng)都是通過(guò)內(nèi)毒素和細(xì)胞膜結(jié)合而介導(dǎo)的，內(nèi)毒素和細(xì)胞膜的結(jié)合可以分為特異性（通過(guò)受體）和非特異性（通過(guò)細(xì)胞膜脂類成分）兩種，后一種結(jié)合往往以不飽和性和無(wú)配體特異性為特征的。內(nèi)毒素和細(xì)胞膜的非特異性結(jié)合可以通過(guò)許多細(xì)胞膜的活性成分來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這些活性成分包括糖蛋白、糖磷脂和磷脂。事實(shí)上，這幾種活性成分都已證實(shí)能和內(nèi)毒素非特異結(jié)合，但是，通過(guò)對(duì)內(nèi)毒素

菌苗、疫苗、血液制品及干擾素，如何檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素？2022/11/02: 生物制劑的制備過(guò)程中也需要檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素。生物制劑的種類很多，其中包括菌苗、疫苗、血液制品及干擾素（IFN）等那它們?nèi)绾螜z測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素呢？一、菌苗菌苗在制備時(shí)，多多少少都會(huì)受到內(nèi)毒素的污染，尤其是革蘭氏陰性菌菌苗，受內(nèi)毒素污染的程度會(huì)更高。為了能更好地檢測(cè)菌苗中的細(xì)菌內(nèi)毒素，可以采用靈敏度高、檢測(cè)速度快且準(zhǔn)確并可定量的鱟試驗(yàn)法。有試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，用鱟試驗(yàn)法檢測(cè)多糖體菌苗的細(xì)菌內(nèi)毒素含量時(shí)，內(nèi)毒素含量程度高的菌苗（14000ng內(nèi)毒素/100μg）其發(fā)熱反應(yīng)率也是最高的，1.8～1.9%的肛溫都超過(guò)

脂多糖結(jié)合蛋白介導(dǎo)細(xì)胞激活的信號(hào)傳遞是怎么樣的？2022/11/02: 脂多糖（LPS）作用的靶細(xì)胞主要是單核/巨噬細(xì)胞。LPS在誘導(dǎo)單核/巨噬細(xì)胞合成的分泌細(xì)胞因子的過(guò)程中脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）起著信息轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。血漿中的LBP與LPS的類脂A部分連接形成高親和性復(fù)合物，這一復(fù)合物再經(jīng)膜蛋白CD14受體連接于巨噬細(xì)胞表面，使巨噬細(xì)胞快速激活，并誘發(fā)腫瘤壞死因子（TNF）的產(chǎn)生及白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）mRNA的轉(zhuǎn)錄。單核/巨噬細(xì)胞在接受TNF、LPS、IL-1刺激后釋放IL-6，LPS與TNF、IL-1、干擾素r（IFNr）之間具有協(xié)同作用。IL-6一方面

細(xì)胞識(shí)別內(nèi)毒素機(jī)制以及CD14和其他一些脂多糖的識(shí)別分子的介紹2022/11/02: 一、細(xì)胞識(shí)別內(nèi)毒素機(jī)制脂多糖（LPS）與脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）形成復(fù)合物后，能有效地與可溶性CD14（sCD14）或膜結(jié)合CD14（mCD14）受體結(jié)合，并活化細(xì)胞反應(yīng)。LPS在細(xì)胞膜上的識(shí)別在LPS的攝取和誘發(fā)穿膜信號(hào)乃至細(xì)胞的活化是必須的。雖然有幾種蛋白質(zhì)與此有關(guān)，但其中CD14提呈LPS至具有功能性的LPS受體上。sCD14途徑控制內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞對(duì)LPS的反應(yīng)。最近研究表明，通過(guò)依賴LBP/CD14途徑的LPS誘導(dǎo)細(xì)胞活化過(guò)程中，細(xì)胞中蛋白酪氨酸磷酸化起重要作用。二、CD14和其他一

內(nèi)毒素細(xì)胞內(nèi)受體及其介導(dǎo)的信號(hào)傳遞2022/11/01: 受體是細(xì)胞表面或胞內(nèi)亞細(xì)胞組分中的一種蛋白分子，它可以識(shí)別并特異地與有生物活性的化學(xué)信號(hào)分子（配體）結(jié)合，從而激活或啟動(dòng)一系列生物化學(xué)反應(yīng)，使該化學(xué)信號(hào)分子發(fā)揮其特定的生物效應(yīng)。水溶性信號(hào)分子通過(guò)細(xì)胞表面受體起作用，而脂溶性信號(hào)分子則主要通過(guò)細(xì)胞內(nèi)受體行使其效應(yīng)。目前，已知至少有三類細(xì)胞表面的受體：通道關(guān)聯(lián)受體（channel-linkedreceptor）、催化受體（catalyticreceptor）和G-蛋白關(guān)聯(lián)受體（G-protein-linkedreceptor）。這是按其轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的不

內(nèi)毒素細(xì)胞間的信號(hào)傳遞是怎么樣的？2022/11/01: 生命活動(dòng)的信息是通過(guò)信號(hào)來(lái)傳遞的。多細(xì)胞體中，細(xì)胞通訊（cellcommunication）包括細(xì)胞與細(xì)胞之間的通訊（即胞間信號(hào)傳遞）和細(xì)胞內(nèi)的通訊（即細(xì)胞內(nèi)信使傳遞）。細(xì)胞間信號(hào)傳遞細(xì)胞間的信號(hào)傳遞有三種形式:（1）通過(guò)分泌化學(xué)物質(zhì)作為信號(hào)如激素，傳遞給一定距離外的其他細(xì)胞；（2）信號(hào)分子以膜結(jié)合的方式，通過(guò)直接的物理接觸，影響其他細(xì)胞，如細(xì)胞識(shí)別與粘合現(xiàn)象；（3）細(xì)胞間形成間隙連接，小分子物質(zhì)可通過(guò)間隙連接直接進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞的胞漿內(nèi)并發(fā)生作用，從通訊的聯(lián)絡(luò)方式看，第一種形式屬于間接聯(lián)絡(luò)類型，

細(xì)菌內(nèi)毒素中類脂A及脂多糖的立體構(gòu)型介紹2022/11/01: 在《細(xì)菌內(nèi)毒素中脂多糖之類脂A化學(xué)結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)介》一文中有提到：類脂A（又稱脂質(zhì)A），它是脂多糖的毒性及生物學(xué)活性中心。為一種糖磷脂，現(xiàn)認(rèn)為細(xì)菌外膜的外層可能是類脂A。接下來(lái)介紹：類脂A及脂多糖的立體構(gòu)型。一、離體脂多糖的雙層結(jié)構(gòu)應(yīng)用X-衍射技術(shù)已經(jīng)證明脂多糖無(wú)論處于干燥狀態(tài)還是在水溶液中，均能形成雙層結(jié)構(gòu)。根據(jù)脂多糖的來(lái)源不同，它們可形成不同厚度的雙層結(jié)構(gòu)。例如奇異變形桿菌脂多糖可形成9.6nm厚度的雙層結(jié)構(gòu)，大腸桿菌B/r脂多糖可形成10nm厚度的雙層結(jié)構(gòu)（根據(jù)脂多糖中的含水量不同其厚度可有改變

細(xì)菌內(nèi)毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)之O-特異多糖鏈和核心寡聚糖的介紹2022/10/31: 內(nèi)毒素的主要化學(xué)成分為脂多糖(LPS)，脂多糖由結(jié)構(gòu)及生物學(xué)活性互不相同的三部分組成，即O-特異多糖鏈(O-specificpelysaccharidechain)、核心多糖(Coreoligosaccharide)、類脂A(lpidA)。有的學(xué)者將脂多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)分為兩大部分，即多糖(polysaccharide)和類脂A(LipidA)，多糖部分又可進(jìn)一步分為O-特異性多糖鏈及核心寡聚糖(圖6)。今天將介紹內(nèi)毒素中脂多糖的O-特異多糖鏈(O-specificpelysaccharidecha

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