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DNA和核酸基礎(chǔ)簡(jiǎn)單介紹2023/05/08: DNA是生物學(xué)世界中兩個(gè)所謂的核酸之一，并且比其同核糖核酸。核酸由稱為核苷酸的單元的聚合物組成。每個(gè)核苷酸由一個(gè)五碳糖，一個(gè)磷酸基團(tuán)和四個(gè)富氮堿基之一組成。在DNA中，糖是脫氧核糖，而在RNA中，糖是核糖。而且，盡管DNA核苷酸包含腺嘌呤，胞嘧啶，鳥嘌呤和胸腺嘧啶的四個(gè)堿基之一，但是在RNA中，尿嘧啶代替了胸腺嘧啶。DNA是雙鏈的，兩條鏈在每個(gè)核苷酸處都被含氮堿基鍵合。腺嘌呤（A）與僅與胸腺嘧啶（T）配對(duì)，而胞嘧啶（C）與僅與鳥嘌呤（G）配對(duì)。DNA分子之間的差異是造成人與人之間遺傳變異的原因，

簡(jiǎn)單介紹大分子化合物有哪些類別2023/05/06: 碳水化合物：碳水化合物由單糖（糖）及其聚合物組成。單糖結(jié)合在一起形成多糖，多糖是碳水化合物的聚合物。最常見的單糖是葡萄糖，它是所有動(dòng)植物中最有價(jià)值的糖之一。碳水化合物的功能是充當(dāng)所有生物的存儲(chǔ)和結(jié)構(gòu)的能源。對(duì)于植物而言，淀粉是主要能源，纖維素是提供結(jié)構(gòu)和支持的物質(zhì)。對(duì)于動(dòng)物來說，糖原提供能量，幾丁質(zhì)提供結(jié)構(gòu)和支持。血脂：脂質(zhì)有三種形式-脂肪，類固醇和磷脂。這些脂質(zhì)的主要功能是能量和絕緣。脂肪以飽和或不飽和形式出現(xiàn)，并且不溶，因此具有浮力。飽和脂肪存在于動(dòng)物體內(nèi)，在室溫下為固體。不飽和脂肪存在于植

化學(xué)鍵基礎(chǔ)的簡(jiǎn)單介紹2023/05/05: 原子的原子核帶正電，而在原子的物理邊緣周圍游動(dòng)的電子帶負(fù)電，這一事實(shí)決定了各個(gè)原子彼此相互作用的方式。當(dāng)兩個(gè)原子非?？拷鼤r(shí)，無(wú)論它們代表什么元素，它們都互相排斥，因?yàn)樗鼈兏髯缘碾娮邮紫取跋嘤觥?，并且?fù)電荷推擠其他負(fù)電荷。它們各自的原子核雖然不如它們的電子那么緊密，但也彼此排斥。但是，當(dāng)原子相距足夠的距離時(shí)，它們往往會(huì)相互吸引。（離子，正如您很快將看到的，是一個(gè)例外；兩個(gè)帶正電的離子將始終互相排斥，而對(duì)帶負(fù)電的離子對(duì)則相同。）這意味著在一定的平衡距離處，吸引力和排斥力平衡，并且除非受到其他力的干擾

比色法檢測(cè)生物素/蛋白質(zhì)摩爾質(zhì)量比2023/04/26: 1.吸取900ulHABA/親和素溶液于1ml比色杯。2.測(cè)定該溶液在500nm處的吸收值并記錄為“A500HABA/Avidin”。3.吸取100ul生物素標(biāo)記的蛋白于杯中并測(cè)定500nm的吸光度值，記為A500HABA/Avidin/Biotin（數(shù)值必須恒定15s以上）如果A500HABA/Avidin/Biotin的值不超過（≤）0.3，重新稀釋待測(cè)樣品并檢測(cè)。注：計(jì)算結(jié)果時(shí)必須考慮稀釋度。計(jì)算Biotin/Protein摩爾比：①A=生物素化的蛋白毫摩爾濃度＝蛋白濃度（mg/ml）/蛋

蛋白提取實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單介紹2023/04/25: 常用的方法是使用溶液法進(jìn)行蛋白質(zhì)提?。ɡ鏡IPA裂解物），但是在蛋白質(zhì)提取中通常會(huì)產(chǎn)生兩種不同的成分，即RIPA可溶性和RIPA不溶性成分。通常，RIPA不溶成分會(huì)被我們直接丟棄并忽略。但是有文章證實(shí)，丟棄的RIPA不溶成分中存在許多蛋白質(zhì)。換句話說，通過溶液法提取的總蛋白質(zhì)不是完整的蛋白質(zhì)，而只是一些可溶性蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的溶液提取將人工激活caspase-3和caspase-7；它還會(huì)人為地激活某些激酶活性；影響磷酸化研究；影響細(xì)胞外基質(zhì)；影響定量，定性蛋白質(zhì)研究。目前，通過離心柱法提取蛋白

MLR混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介2023/04/24: 兩個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體功能正常的淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時(shí)，由于HLAⅡ類抗原中D和DP抗原（淋巴細(xì)胞鑒定的抗原，SD抗原）不同，可相互刺激對(duì)方的T細(xì)胞發(fā)生增殖，此為雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)；若將其中一方的淋巴細(xì)胞先用MitomycinC處理或射線照射使之細(xì)胞中DNA失去復(fù)制能力，但仍能刺激另一方淋巴細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，稱為單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。兩個(gè)個(gè)體間HLA抗原差異程度越大，反應(yīng)越強(qiáng)烈，可通過細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)檢查或3H-TdR摻入率檢測(cè)反應(yīng)細(xì)胞的增殖水平。如用經(jīng)照射的、已知D位點(diǎn)抗原的純合子分型細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，則

牛肉膏提取蛋白胨培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)介紹2023/04/23: 1.牛肉膏提取蛋白胨培養(yǎng)基是使用比較廣泛，常見的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基之一，有時(shí)也稱為普通培養(yǎng)基。它包含牛肉提取物，蛋白ept和氯化鈉。其中，牛肉提取物為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽和蛋白and主要提供氮源，而氯化鈉則提供無(wú)機(jī)鹽。當(dāng)制備固體培養(yǎng)基時(shí)，添加一定量的瓊脂作為凝結(jié)劑。瓊脂在96℃下以常用濃度溶解。通常，將其與石棉網(wǎng)在沸水浴中或沸水浴中煮沸，以防止瓊脂燃燒。瓊脂在40°C下固化，通常不會(huì)被微生物分解。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和溫度而變化。2.由于這種培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此有必要

連接產(chǎn)物純化的步驟簡(jiǎn)單介紹2023/04/21: 1．需要將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至一1.5mlEppendorf移液器管中，加入下列試劑:10μlofddH2O、2μlof3MNaAC（PH5.2）、50μlof無(wú)水乙醇、輕輕混勻，稍微離心并將其置于-20℃放置1小時(shí)以上；2.4℃，topSpeed離心30分鐘；3.小心移去上清液，避免接觸到管底的沉淀物；4.需要加入500μl70%的乙醇，輕輕顛倒幾次洗滌沉淀（注：不要離心混勻）；5.4℃，topSpeed離心5分鐘；6.小心移去上清液，將此Eppendorf移液器管置空氣中直至無(wú)乙醇?xì)馕叮?.加入1

TRIzol RNA提取操作步驟2023/04/20: 1.樣品處理：培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞1-5×107，轉(zhuǎn)移1.5ml離心管在其中，加入1mlTrizol，混合均勻，在室溫下靜置5分鐘。組織：取50-100mg組織（新鮮或-70℃，組織保存在液氮中）置于1.5ml離心管中，加1mlTrizol充分勻漿，在室溫下靜置5min。2.加入0.2mlCHCl3，振搖15s，靜置2min。3.4℃離心12000g×15min，取上清液。4.加入0.5ml異丙醇，將試管中的液體輕輕混合，然后在室溫下靜置10分鐘。5.4℃離心12000g×10min，棄去上清液。

RNA的免疫共沉淀分離及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理2023/04/18: 非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)使得RNA領(lǐng)域再次成為了生命科學(xué)研究關(guān)注的焦點(diǎn)。因?yàn)镽NA是一種不穩(wěn)定的生物大分子，絕大多數(shù)的RNA都需要與特定的RNA結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合形成RNA/蛋白復(fù)合物才能穩(wěn)定存在于細(xì)胞中；不僅如此，RNA與RNA結(jié)合蛋白之間的動(dòng)態(tài)關(guān)聯(lián)貫穿和伴隨了RNA的轉(zhuǎn)錄合成、加工和修飾、胞內(nèi)運(yùn)輸和定位、功能發(fā)揮及降解的整個(gè)生命循環(huán)。鑒于此，利用RNA結(jié)合蛋白分離或發(fā)現(xiàn)鑒定功能性RNA分子是RNA研究領(lǐng)域中一個(gè)不能缺少的研究方法。簡(jiǎn)單地說，就是利用RNA結(jié)合蛋白的抗體免疫沉淀RNA/蛋白復(fù)合物，再?gòu)某?

鹽析法-多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化2023/04/17: 蛋白質(zhì)溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性而轉(zhuǎn)移析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨，硫酸鈉，氯化鈉等。鹽析時(shí)所需的鹽濃度及pH值不同，故可用于對(duì)混和蛋白質(zhì)組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白，球蛋白都沉淀出來，鹽析出沉淀的蛋白質(zhì)，經(jīng)透析除鹽，仍保證蛋白質(zhì)的活性。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH至等電點(diǎn)后，再用鹽析法則蛋白質(zhì)沉淀的效果更好。鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定PH和溫度下通過改變離子強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)，用于早期的粗提液；第二

對(duì)流免疫電泳實(shí)驗(yàn)的操作步驟2023/04/11: 1.瓊脂平板的制備可以根據(jù)需要選擇大玻璃平板和小玻璃載玻片。大玻璃板需要約10毫升的瓊脂，小玻璃片需要約3.5毫升。固化后打孔。該方法與瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)相同。2.添加樣品：在左孔中添加患者血清（原始血清和10倍稀釋血清各占據(jù)一個(gè)孔），在右側(cè)添加抗血清，每片均應(yīng)有陽(yáng)性對(duì)照。3.電泳操作流程：在電泳槽高度的三分之二處添加0.05mPH8.6Barbita酸鹽緩沖液。請(qǐng)注意，兩個(gè)水箱中的液位盡可能高。將帶有樣品的玻璃板放在電泳槽上，將抗原端連接到負(fù)極，將抗體端連接到正極過濾紙浸濕后作為鹽橋，過濾紙與瓊脂板

染色體Q顯帶實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2023/04/10: 1.熒光染料染色后，必須正確掌握分色時(shí)間，這是Q頻段是否清晰的關(guān)鍵，如果熒光太弱，則可以小心地取下玻璃蓋，并用熒光染料重新染色，然后順序分離顏色，蓋膜，如果熒光太強(qiáng)且?guī)顖D案不清晰，請(qǐng)取下蓋玻片，然后再次將其放在緩沖液中一分鐘。2.Q傳送帶的膠片年齡不應(yīng)太長(zhǎng)，通常在一周內(nèi)。3.褪色后，熒光染色膜仍可用于G波段染色，可以將熒光褪色在pH6.0緩沖液中浸泡12至24小時(shí)，然后干燥以備后用。4.使用熒光顯微鏡時(shí)，根據(jù)光源可分為兩種，通常，直接下降類型更好，由于直接落下的光源來自目鏡和物鏡之間，并且物鏡

6孔板轉(zhuǎn)染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟2023/04/07: 1.轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞于6孔板，5×104每孔，第二天轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到60%-70%每孔。2.轉(zhuǎn)染前半小時(shí)將完、全培養(yǎng)基換無(wú)血清培養(yǎng)基1.9ml。3.A液：RNA100pmol/DNA2μg（根據(jù)核酸類型不同，用量不同）加入50ulOpti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。4.B液：脂質(zhì)體使用前輕輕混勻，脂質(zhì)體5ul加入50ulOpti-MEM無(wú)血清培養(yǎng)基，輕輕混勻，室溫靜置5min。5.B液加入到A液中，用槍輕輕混勻，室溫靜止20min。6.將混合液均勻分散慢慢滴加到6孔板

分離植物細(xì)胞質(zhì)壁原理2023/04/06: 分離植物細(xì)胞質(zhì)壁實(shí)驗(yàn)過程中，當(dāng)外部溶液的濃度大于細(xì)胞液的濃度時(shí)，根據(jù)擴(kuò)散原理，水將從細(xì)胞液中滲入到外部溶液中，并且由于滲透作用而流失的水會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壁和原生質(zhì)層收縮到一定程度。由于原生質(zhì)層比細(xì)胞壁更具柔韌性，因此當(dāng)細(xì)胞繼續(xù)失水時(shí)，原生質(zhì)層將逐漸與細(xì)胞壁分離，即，逐漸發(fā)生質(zhì)體分離。相反，如果外部溶液的濃度大于細(xì)胞液的濃度，則細(xì)胞將通過滲透作用吸收水分，整個(gè)原生質(zhì)層將緩慢返回其原始狀態(tài)，從而使植物細(xì)胞將逐漸經(jīng)歷溶質(zhì)化和恢復(fù)。

凍干培養(yǎng)細(xì)菌介紹2023/04/04: 冷凍干燥，也稱為凍干或冷凍干燥，是在產(chǎn)品冷凍后除去水分并將其置于真空中的過程。這使得冰可以從固體變?yōu)檎羝?，而無(wú)需經(jīng)過液相。冰（或其他冷凍溶劑）通過升華過程從產(chǎn)品中可以去除，是結(jié)合水分子通過解吸過程去除。常用細(xì)菌培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基，LB培養(yǎng)液，TSB培養(yǎng)液，TSA培養(yǎng)基等，F(xiàn)T培養(yǎng)液，TSC培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，血瓊脂平板。什么情況下適合冷凍干燥:長(zhǎng)期保存細(xì)菌、真菌、酵母或其他微生物培養(yǎng)物的最佳方法之一是使用冷凍干燥過程。這一簡(jiǎn)短的實(shí)驗(yàn)室程序可以與任何商用冷凍干燥器一起進(jìn)行，以保存培養(yǎng)物

脫鹽的簡(jiǎn)單介紹2023/04/03: 寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結(jié)構(gòu)，首先必須去除保護(hù)基團(tuán)。通過濃ammoniumhydroxide處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-氰乙氧基--磷酸二脂鍵的保護(hù)基團(tuán)，以及堿基的保護(hù)基團(tuán)基（苯甲酰基和異丁基）被去除，從而形成了天然的DNA結(jié)構(gòu)。然而，必要的去保護(hù)步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機(jī)化合物。所有非必須有機(jī)化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進(jìn)行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機(jī)雜質(zhì)，但它不能有效移除合成中產(chǎn)生微

原位雜交組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)單介紹2023/03/28: 組織取材：組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞最好在30min內(nèi)固定。固定目：①保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)；②最大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平；③使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。常用的固定劑是多聚甲醛，與其它醛類固定劑（如戊二醛）不同，多聚甲醛不會(huì)與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接，因而不會(huì)影響探針穿透入細(xì)胞或組織。增強(qiáng)組織的通透性和核酸探針的穿透性：稀酸處理和酸酐處理：為防止探針與組織中堿性蛋白之間的靜電結(jié)合，以降低背景，雜交前標(biāo)本可用0.25%乙酸酐處理10min，經(jīng)乙酸酐處理后

考馬斯亮藍(lán)染色法的突出優(yōu)點(diǎn)介紹2023/03/27: 1.靈敏度高：估計(jì)約為L(zhǎng)owry方法的四倍，他的較低蛋白質(zhì)檢測(cè)量達(dá)到1mg。這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)和染料的組合所產(chǎn)生的顏色變化很大，并且蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物具有更高的消光系數(shù)，因此光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry方法大得多。2.測(cè)量快速簡(jiǎn)便：只需添加一個(gè)試劑。只需約5分鐘即可完成樣品的測(cè)定。由于染料和蛋白質(zhì)結(jié)合的過程，只需約2分鐘即可完成，其顏色可在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定，并且顏色穩(wěn)定性在5分鐘至20分鐘之間較佳。因此，不需要像Lowry方法那樣耗時(shí)且嚴(yán)格的時(shí)間控制。3.干擾物質(zhì)少：例如Tris緩沖液，糖

簡(jiǎn)單介紹質(zhì)粒DNA提取實(shí)驗(yàn)操作步驟2023/03/24: 1.細(xì)菌繁殖：LB培養(yǎng)基，2ml/20ml，37℃，200rpm，搖動(dòng)過夜；2.離心10分鐘，轉(zhuǎn)速為5000rpm，4°C；丟棄液體；3.用預(yù)冷的TES緩沖液洗滌沉淀物（細(xì)胞），在4°C下以10rpm，5000rpm離心10分鐘，加入預(yù)冷的1ml溶液I，并冰浴10分鐘；4.重懸，加入150ul溶菌酶母液，在室溫下靜置5分鐘；5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分鐘；6.加入0.9ml預(yù)冷的乙酸鉀，混合均勻，在4°C下以12000rpm離心10分鐘；7.加入1.5ml異丙醇，并將其放在-2

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