Rapamycin (Sirolimus)生物活性
| 產(chǎn)品描述 | Rapamycin (Sirolimus)是一種選擇性的mTOR抑制劑，IC50為~0.1 nM。 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 靶點(diǎn) | mTOR | |||||
| IC50 | ~0.1 nM [1] | |||||
| 體外研究 | Rapamycin作用于HEK293細(xì)胞，抑制內(nèi)源性mTOR活性，IC50為~0.1 nM,而iRap和AP21967 作用時(shí)，IC50分別為~5 nM 和~10 nM。[1] Rapamycin處理釀酒酵母，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停在G1/S期，且抑制翻譯。[2] Rapamycin顯著抑制T98G和U87-MG細(xì)胞活力，這種作用具有劑量依賴性，IC50分別為2 nM和 1 μM, 而對(duì)U373-MG細(xì)胞沒有作用活性，IC50>25 μM。Rapamycin(100 nM) 作用于對(duì)Rapamycin敏感的U87-MG和T98G細(xì)胞，通過抑制mTOR功能，而誘導(dǎo)細(xì)胞周期停在G1期，也誘導(dǎo)自噬而不是凋亡。[6] | |||||
| 體內(nèi)研究 | 在體內(nèi)，Rapamycin 處理，特定阻斷mTOR下游靶點(diǎn)，如p70S6K磷酸化和激活，和PHAS-1/4E-BP1導(dǎo)致的eIF4E抑制釋放, *阻斷跖肌重量和纖維尺寸的肥厚增高。[3] 短期Rapamycin處理,即使按zui低劑量0.16 mg/kg處理, 強(qiáng)抑制p70S6K活性, 與提高的腫瘤細(xì)胞死亡和Eker腎臟腫瘤壞死相關(guān)。[4] Rapamycin作用于CT-26移植瘤模型，通過降低VEGF產(chǎn)量，及阻斷VEGF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞信號(hào)，而抑制轉(zhuǎn)移性腫瘤生長(zhǎng)和血管新生。[5] Rapamycin每天按4 mg/kg劑量處理C6移植瘤，顯著降低腫瘤生長(zhǎng)，和腫瘤血管通透性。[7] | |||||
| 特征 | ||||||
*的實(shí)驗(yàn)操作(此*來自于公開的文獻(xiàn)所以Selleck并不保證其有效性)
激酶實(shí)驗(yàn): [1]
| mTOR激酶免疫印跡法測(cè)定 | HEK293細(xì)胞按每孔2-2.5×105個(gè)細(xì)胞接種在12孔板上，DMEM培養(yǎng)基上血清饑餓處理24小時(shí)。使用濃度不斷增加的Rapamycin(0.05-50 nM)在 37oC下處理細(xì)胞15分鐘。加入血清，終濃度為20%，在37oC下處理30分鐘。細(xì)胞溶解，使用SDS-PAGE分離細(xì)胞裂解液。再溶解的蛋白轉(zhuǎn)移到聚偏(二)氟乙烯膜上，使用抗p70 S6激酶Thr-389的磷酸化的一抗進(jìn)行免疫印跡。使用ImageQuant 和KaleidaGraph分析數(shù)據(jù)。 |
|---|
細(xì)胞試驗(yàn): [6]
| 細(xì)胞系 | U87-MG, T98G, 和 U373-MG |
|---|---|
| 濃度 | 溶于DMSO,終濃度為~25 μM |
| 處理時(shí)間 | 72 小時(shí) |
| 方法 | 使用不同濃度Rapamycin處理細(xì)胞72小時(shí)。為了測(cè)量細(xì)胞活力，通過胰蛋白酶化收集細(xì)胞，使用臺(tái)酚藍(lán)染色，計(jì)數(shù)每孔的存活細(xì)胞數(shù)。為了測(cè)定細(xì)胞周期, 使細(xì)胞胰蛋白酶化,與70%乙醇混合, 使用碘化丙啶染色。使用FACScan流式細(xì)胞儀和CellQuest軟件分析樣本DNA含量。為了測(cè)定凋亡, 細(xì)胞染色，通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)的dUTP缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）技術(shù)，使用一個(gè)ApopTag凋亡檢測(cè)試劑盒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。為了測(cè)定酸性囊泡細(xì)胞器(AVO)的進(jìn)展,使用吖啶橙(1 μg/mL)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色15分鐘，使用熒光顯微鏡檢測(cè)。為了量化AVOs的進(jìn)展,使用吖啶橙(1 μg/mL) 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色15分鐘, 然后使用胰蛋白酶-EDTA使其從實(shí)驗(yàn)板上移除，zui后使用FACScan流式細(xì)胞儀和CellQuest 軟件分析。為了分析自噬過程，細(xì)胞和0.05 mM丹(磺)酰戊二胺(MDC)在37oC下溫育10分鐘，然后在熒光顯微鏡下觀察。 |
動(dòng)物實(shí)驗(yàn): [7]
| 動(dòng)物模型 | 皮下接種表達(dá)VEGF-A的C6大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的無胸腺Nu/Nu小鼠 | ||
|---|---|---|---|
| 配制 | 溶于溶劑溶液(0.2% 羧甲基纖維素和0.25% Tween-80，溶于無菌水) | ||
| 劑量 | ~4 mg/kg/day | ||
| 給藥處理 | 腹腔注射 | ||
| 溶解度 | 0.5% CMC/0.25% Tween 80 30 mg/mL | ||
| * 溶解度檢測(cè)是由Selleck技術(shù)部門檢測(cè)的，可能會(huì)和文獻(xiàn)中提供的溶解度有所差異，這是由于生產(chǎn)工藝和批次不同產(chǎn)生的正常現(xiàn)象。 | |||
不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物依據(jù)體表面積的等效劑量轉(zhuǎn)換表（數(shù)據(jù)來源于FDA指南）
| 狒狒 | 狗 | 猴 | 兔 | 豚鼠 | 大鼠 | 倉(cāng)鼠 | 小鼠 | |
| 重量 (kg) | 12 | 10 | 3 | 1.8 | 0.4 | 0.15 | 0.08 | 0.02 |
| 體表面積 (m2) | 0.6 | 0.5 | 0.24 | 0.15 | 0.05 | 0.025 | 0.02 | 0.007 |
| Km 系數(shù) | 20 | 20 | 12 | 12 | 8 | 6 | 5 | 3 |
| 動(dòng)物A (mg/kg) = 動(dòng)物B (mg/kg) × | 動(dòng)物B的Km系數(shù) |
| 動(dòng)物A的Km系數(shù) |
例如，依據(jù)體表面積折算法，將白藜蘆醇用于小鼠的劑量22.4 mg/kg 換算成大鼠的劑量，需要將22.4 mg/kg 乘以小鼠的Km系數(shù)（3），再除以大鼠的Km系數(shù)（6），得到白藜蘆醇用于大鼠的等效劑量為11.2 mg/kg。
| 大鼠劑量 (mg/kg) = 小鼠劑量 (22.4 mg/kg) × | 小鼠的Km系數(shù)(3) | = 11.2 mg/kg |
| 大鼠的Km系數(shù)(6) |
1
參考文獻(xiàn)
[1] Edwards SR, et al. J Biol Chem, 2007, 282(18), 13395-13401.
[2] Barbet NC, et al. Mol Biol Cell, 1996, 7(1), 25-42.
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Clinical Trial Information( data from http://clinicaltrials.gov)
| NCT Number | Recruitment | Conditions | Sponsor /Collaborators | Start Date | Phases |
|---|---|---|---|---|---|
| NCT02042326 | Not yet recruiting | Arteriovenous Malformations (Stage II to IV) | Centre Hospitalier Universitaire, Amiens | January 2015 | Phase 2 |
| NCT02240407 | Not yet recruiting | Pompe Disease | University of Florida | October 2014 | Phase 1 |
| NCT02238496 | Recruiting | Brain Tumor, Recurrent|Glioblastoma|Anaplastic Astrocytoma|Anaplastic Oligodendroglioma|Mixed Glioma | Andrew Lassman|Pfizer|AEterna Zentaris|Columbia University | July 2014 | Phase 2 |
| NCT02177760 | Recruiting | Severe Combined Immunodeficiency|Transplacental Maternal Engraftment|Stem Cell Transplant | University of California, San Francisco | July 2014 | Phase 2 |
| NCT02214706 | Recruiting | Port-Wine Stain | Erasmus Medical Center | July 2014 | -- |
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化學(xué)數(shù)據(jù)
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| 分子量 | 914.18 |
|---|---|
| 化學(xué)式 | C51H79NO13 |
| CAS號(hào) | 53123-88-9 |
| 穩(wěn)定性 | 3年 -20℃粉狀 |
|---|---|
| 6月-80℃溶于DMSO | |
| 別名 |
| 溶解性 (25°C) * | 體外 | DMSO | 20 mg/mL (21 mM) |
|---|---|---|---|
| 水 | <1 mg/mL (<1 mM) | ||
| 乙醇 | <1 mg/mL (<1 mM) | ||
| 體內(nèi) | 0.5% CMC/0.25% Tween 80 | 30 mg/mL | |
| * <1 mg/ml 指產(chǎn)品微溶或不溶 * 溶解度檢測(cè)是由Selleck技術(shù)部門檢測(cè)的，可能會(huì)和文獻(xiàn)中提供的溶解度有所差異，這是由于生產(chǎn)工藝和批次不同產(chǎn)生的正?，F(xiàn)象。 | |||
| Chemical Name | (3S,6R,7E,9R,10R,12R,14S,15E,17E,19E,21S,23S,26R,27R,34aS)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-Hexadecahydro-9,27-dihydroxy-3-[(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-hydroxy-3-methoxycyclohexyl]-1-methylethyl]-10,21-dimethoxy-6,8,12,14,20,26-hexamethyl-23,27-epoxy-3H-pyrido[2,1-c][1,4]oxaazacyclohentriacontine-1,5,11,28,29(4H,6H,31H)-pentone |
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