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04-24實(shí)驗(yàn)室WB常見問題指南之Marker,染色及內(nèi)參等相關(guān)問題
Marker,染色及內(nèi)參等相關(guān)問題Q:用的是預(yù)染marker,但是電泳總跑不全8條帶,請問什么原因?怎樣改善?膠用過8%,10%,12%,都是這樣。marker是新買的。A:一般來說,是小分子量Marker跑走了,可以增加膠濃度或減少電泳時(shí)間。梯度膠也是不錯(cuò)的選擇。(梯度凝膠愛必信就可提供呦)Q:WesternBlot哪種染色好?A:(1)陰離子染料是zui常用的,特別是氨基黑,脫色快,背景低檢測極限可達(dá)到1.5μg,考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度,但脫色慢,背景高。麗春紅S和快綠在檢測后容易從2018
04-242018
04-242018
04-24Western Blot(WB)實(shí)驗(yàn)詳解
Western免疫印跡(WesternBlot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測。對已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。我們將通過以下幾個(gè)方面來詳細(xì)地介紹一下WesternBlot技術(shù):【原理】與Southern或Northern雜交方法類似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如PVDF膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵2018
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