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牛血清作用2015/12/08: 牛血清的作用：一、能提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。二、能提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。三、在有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。四、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。五、能起酸堿度緩沖液作用。六、能提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

免疫療法對(duì)于癌癥的作用2015/12/08: 相比于只接受樹突狀細(xì)胞治療的患者，隨機(jī)接受破傷風(fēng)注射的患者從預(yù)處理開始的生存期顯著延長(zhǎng)，相比于對(duì)照組的11.6個(gè)月，接受破傷風(fēng)注射的患者中一半人生存了51-101個(gè)月。來自破傷風(fēng)組的一名患者在治療8年后都沒有任何的腫瘤生長(zhǎng)，仍然存活。在一項(xiàng)小型人類研究中，他們招募了12名腦腫瘤患者，一半人被隨機(jī)分配接種破傷風(fēng)加強(qiáng)劑，另一半人接受安慰劑注射。第二天，兩組患者均給予樹突狀細(xì)胞免疫治療。研究人員并不清楚患者接受了哪種治療。這樣的靶向療法利用的是樹突狀細(xì)胞，它訓(xùn)練了免疫系統(tǒng)對(duì)特定的病原體做出反應(yīng)。杜克大

細(xì)胞培養(yǎng)特別注意事項(xiàng)2015/11/04: 特別注意：如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)1.收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過72小時(shí)）2.貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱孵育過一夜到第二天再做消化傳代3.如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題解答2015/11/04: 1冷凍管應(yīng)如何解凍?取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞)，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長(zhǎng)或貼附之問題。3可否使用與

收到細(xì)胞注意事項(xiàng)2015/11/04: 收到細(xì)胞注意事項(xiàng)：1、收到細(xì)胞后，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快。2、，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。3、收到細(xì)胞

收到細(xì)胞后的操作流程及注意事項(xiàng)2015/11/04: 1.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決2.貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)3.生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程2015/11/04: （請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作）1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3ml0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）2．鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散3．取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4．注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)2015/11/04: elisa實(shí)驗(yàn)操作中常見問題分析由于ELISA(酶聯(lián)免疫試驗(yàn))具有靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實(shí)驗(yàn)重要環(huán)節(jié)中的一個(gè)，但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家，我們必須對(duì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識(shí)。的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA技術(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽(yáng)性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高)是各個(gè)廠

ELISA試劑盒技術(shù)樣本的原理和步驟2015/11/04: 自備物品1.酶標(biāo)儀(盡量提前預(yù)熱)2.微量加液器、吸頭3.蒸餾水或去離子水以及濾紙樣本的采集及保存一般的生物標(biāo)本包括有：血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等一般為無菌操作，低溫保存(-80℃、液氮)一．如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求：1、器官實(shí)質(zhì)不能太小2、以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳：如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳3、同一病例裝入同一容器，并做好標(biāo)記4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲(chǔ)存和運(yùn)輸5、實(shí)質(zhì)性器官的處理：5.1、取實(shí)質(zhì)性

小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)2015/10/10: 小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)蘇：將小鼠神經(jīng)干細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4ml小鼠神經(jīng)干細(xì)胞*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細(xì)胞懸液，盡量避免氣泡。按照小鼠神經(jīng)干細(xì)胞說明書中建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移至一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。復(fù)蘇第二天

小鼠胚胎干細(xì)胞（mES細(xì)胞）、小鼠iPS無飼養(yǎng)層培養(yǎng)2015/10/10: 小鼠胚胎干細(xì)胞（mES細(xì)胞）、小鼠iPS無飼養(yǎng)層培養(yǎng)復(fù)蘇：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠iPS細(xì)胞培養(yǎng)液5ml。將小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠iPS細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4ml小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠iPS細(xì)胞培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離

小鼠胚胎干細(xì)胞（mES細(xì)胞）、小鼠iPS細(xì)胞培養(yǎng)2015/10/10: 小鼠胚胎干細(xì)胞（mES細(xì)胞）、小鼠iPS細(xì)胞培養(yǎng)MEF細(xì)胞鋪制：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實(shí)驗(yàn)需要：小鼠胚胎干細(xì)胞使用KM-rP3MEF或CF-1P3MEF；小鼠iPS使用ICR-rP3MEF，復(fù)蘇MEF細(xì)胞若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)2015/10/10: 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的基本培養(yǎng)方法復(fù)蘇：將人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4ml人間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSC）*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的人間充質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細(xì)胞懸液，盡量避免氣泡。按照人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞說明書中建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移至一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法2015/10/09: 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)蘇：將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4ml人間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSC）*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的人間充質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細(xì)胞懸液，盡量避免氣泡。按照人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞說明書中建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移至一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。放入37℃

人胚胎干細(xì)胞（hES）培養(yǎng)方法2015/10/09: 人胚胎干細(xì)胞（hES）培養(yǎng)MEF細(xì)胞鋪制：在T25培養(yǎng)瓶中加入5%Matrigel，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實(shí)驗(yàn)需要復(fù)蘇MEF若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含2mlMEF*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5m

人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（hiPS）培養(yǎng)方法2015/10/09: 人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞（hiPS）培養(yǎng)方法以下試劑和方法來自ATCC，僅供參考。若選用其它品牌的培養(yǎng)液請(qǐng)與您的試劑提供商。hiPS無飼養(yǎng)層*培養(yǎng)液（ATCC，ACS-3002），hiPS無飼養(yǎng)層消化液（ATCC，ACS-3010），hiPS無飼養(yǎng)層凍存液（ATCC，ACS-3020），基質(zhì)膠（ATCC，ACS-3035），ROCKInhibitorY27632（ATCC，ACS-3030）復(fù)蘇：將人iPS細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋

MEF P3細(xì)胞基本培養(yǎng)方法2015/10/09: MEFP3細(xì)胞的基本培養(yǎng)方法MEF細(xì)胞鋪制：一.作為【小鼠胚胎干細(xì)胞、小鼠iPS細(xì)胞】用飼養(yǎng)層時(shí)的使用方法：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個(gè)T25培養(yǎng)瓶中約加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實(shí)驗(yàn)需要：mES使用KM-rP3MEF；小鼠iPS使用ICR-rP3MEF或都使用CF-1-rP3MEF，復(fù)蘇MEF細(xì)胞若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解

MEF P0細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法2015/10/09: MEFP0細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法復(fù)蘇：將MEFP0細(xì)胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺(tái)內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含3-4mlMEF*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的MEF*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細(xì)胞懸液，盡量避免氣泡。按照MEF細(xì)胞說明書上建議的復(fù)蘇培養(yǎng)體系轉(zhuǎn)移至1個(gè)T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液14ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。復(fù)蘇第二天觀察，

腫瘤細(xì)胞的基本培養(yǎng)方法2015/10/09: 腫瘤細(xì)胞的基本培養(yǎng)方法分為八個(gè)步驟，分別為：(一)準(zhǔn)備和安裝過濾器清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20min進(jìn)行高壓滅菌處理。在超凈臺(tái)內(nèi)打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。(二)合成培養(yǎng)基的配制1、根據(jù)細(xì)胞目錄中的說明，按下表選擇合適品牌及貨號(hào)的培養(yǎng)基干粉，用適量超純水充分溶解。培養(yǎng)基品牌貨號(hào)D-MEM/F-12GIBCO12400024Dulbecco'sMod

細(xì)胞凍存的具體操作步驟2015/09/24: 細(xì)胞一般在凍存及復(fù)蘇的時(shí)候，很多客戶因?yàn)椴僮鞑划?dāng)，比如溫度、保護(hù)劑、時(shí)間等沒控制好，導(dǎo)致凍存及復(fù)蘇細(xì)胞的時(shí)候，細(xì)胞容易出現(xiàn)活性差、狀態(tài)不好等情況，其實(shí)細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是“慢凍快融”，這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作為保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性；緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的物理?yè)p傷。復(fù)蘇細(xì)胞采用快速融化的方法可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞

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